192370. lajstromszámú szabadalom • Jégeső elleni védekezésre alkalmas jégkristályképző hatóanyagot tartalmazó kompozíció
1 192.370 2 cserélő gyantával töltött oszlopra vezetjük. A Sephadex töltet térhálósított poliszacharid, amely funkciós csoportként dietil-2- hidroxl- propil- amino- etil csoportot tartalmaz. Az átfolyatás szobahőmérsékleten történik és 2 órát vesz igénybe. Ezt követően az oszlopot 10-szeres oszloptérfogatú 10 M.10"6 kg koncentrációjú TRIS-acetát [(írisz-hidroxi-metil)- amino-metán-acetát; pH 6,51 pufferrel mossuk. Az aktívanyagot 200-200 cm3 0,1 -1,0 M-os NaCl oldattal szorítjuk le az oszlopról, 6 cm3 -es frakciókat gyűjtve. A frakciók mindegyikének aktivanyag tartalmát 1 mg/cm3-re állítjuk be, majd azokból a 4. példa szerinti higftású sort készítjük el és ugyancsak a 4. példában leírt módon fagyasztás! kísérletet végzünk. Kontrollként NaCl oldatot használunk, melynek koncentrációja azonos volt a találmány szerinti oldatok NaCl koncentrációjával. A találmány szerinti oldatok -5,8, -6,0°C hőmérséklettartományban fagytak meg, míg a megfelelő kontrollok -9,8 és -12,3VC hőmérséklet között. Ez a kísérlet azt bizonyítja, hogy glükózsokkolás eredményeképpen kapott anyag kristálygócképző sajátsággal rendelkezik. 6. példa A 4. példát ismételjük meg, de kiindulási anyagként a 2. példa szerinti baktériummasszát használjuk. A fagyasztási kísérlet eredménye a 4. példában leírtakkal egyezik meg. 7. példa Az 5. példát ismételjük meg, de kiindulási anyagként a 3. példa szerinti baktériummasszát alkalmazzuk. A fagyasztási kísérlet eredménye az 5. példában leírtakkal egyezik meg. 8. példa Az 1. példa szerint előállított baktériummasszából a baktérium sejthártyáját izoláljuk annak megállapítása céljából, hogy van-e kristálygócképző hatása. A 3 1 tenyészetből elkülönített masszát 80 cm3 10M.10"* kg koncentrációjú foszfát pufferrel (KH2 P04; ph 7,0) szuszpendáljuk 0,14 tömeg% merkapto-etanol jelenlétében. Ezután a sejteket ultrahangos kezelésnek vetettük alá 30 másodpercre 15-szőrös ismétléssel, a kezelések között 1 perc szünetet tartva. A készülék teljesítménye 25 W. A feltárás 70 %-os hatásfokú volt. Ezután az ép sejteket 1500 g mellett történő centrifugálással kiülepítjük, majd a felülúszót 30000 g-vel centrifugáljuk 06C-on 40 percen keresztül. A sejthártyát tartalmazó üledéket a fenti foszfát pufferrel kétszer mossuk és centrifugáljuk. Végül az ily módon mosott üledéket foszfátpufferrel szuszpendáljuk, meghatározzuk az aktívanyagtartalmát és a 4. példában leírt hígítási sort készítjük el belőle. A 4. példában ismertetett fagyasztási körülmények között hígítási sor minden egyes tagja -40,0 és -4j3°C közötti hőmérsékleten fagyott meg, szemben a kontrollként használt 10 M.10"* kg koncentrációjú foszfátpufferrel,. mely -10,8°C-nál fagyott meg. 9. példa Az 1. példa szerint előállított baktériummassza centrifugálása után kapott felülúszót a 2. példában leírt módon liofilizáljuk. A művelet végeredményeként kapott fehér port mérjük, majd hígítási sort készítünk belőle a 4. példában leírt módon. A hígítási sor minden egyes tagja 4,2°C-nál fagyott meg. Kontrollként tenyésztési táptalajt, Valamint fteudomonas syringae ice tenyészetének liofilizált felül* úszóját használjuk. Az előbbi -10,2°C-on, az utóbbi pedig -103°C-nál fagyott meg. A kísérlet azt mutatja, hogy a felülúszó tartalmaz jégkristálygóc képző anyagot. 10. példa A 2. példa szerint előállított baktréiummassza felülúszóját háromszor desztillált vízzel duplájára hígítjuk, majd DEAE Sephadex A 50 anioncserélovel szobahőmérsékleten 2 órán át keverjük mágneses keverővei. Ezután az adszorbált anyagot kromatografáló oszlopba töltjük és az oszlopot 10-szeres térfogatú 10 M.10"6 kg koncentrációjú TRIS-acetát (pH 6,5) pufferrel mossuk. A frakcionálási 200-200 ml 0,1 -1,0 M-os NaCl oldattal végezzük 6 cm3-es frakciókat gyűjtve. Minden egyes frakció aktívanyag tartalmát mértük, majd a frakciókkal fagyasztási kísérletet végeztünk. A találmány szerinti frakciók -5,3 és -6°C között fagytak meg. A megfelelő, csak NaCl-t tartalmazó kontroll oldatok fagyása -9,8 és -12,3°C között történt. 11. példa Az 1. példa szerinti nedves baktériummasszából permetezhető készítményt állítunk elő, Egy keverővei ellátott készülékben 0,01- kg 1. péida szerint előállított, a fel ül úszót ól elválasztott baktériummasszát 1 kg 0,1 tömeg%-os NaCl oldattal keverjük el. A folyékony elegyet permetezésre használjuk. 12. példa Keverős készülékben 0,5 kg 2. példa szerinti baktériummasszát 0,1 kg 0,1 %-os NaCl-os oldattal elkeverjük, majd hozzáadunk 0,5 kg Aerosil-t (SiOj -t). Az elegyet homogenizáljuk, majd szobahőmérsékleten szárítjuk. Pirotechnikai úton kijuttatható kompozíciót nyerünk. 13. példa Mindenben a 12. példa szerint járunk el, de a 05 kg SiOa-t helyett 0,7 kg szintetikus zeolitot keverünk az elegyhez. A homogenizálás és szobahőmérsékleten történő szárítás után pirotechnikai úton kijuttatható kompozíciót nyerünk. 14. példa Mindenben all. példa szerint járunk el, de a baktériummasszát 2 kg 50 tömeg%-os vizes cellulóz-acetát oldattal keverjük el. 15. példa Az 1. példa szerint előállított baktériummssszából 0,1 tömeg%-os NaCl oldattal 0,1; 0,2 és 1,0 gA koncent-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
