192365. lajstromszámú szabadalom • Eljárás furo (3,2-c) piridin-származékok és az ezeket a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 192 365 Táblázat I általános képlet Vegyület Példa Rj r2 Rs Só/bázis Olvadáspont (°C) 20 4-CH30-C6HU H H 10 268-269 21 8 4-Br-C6H, H H 10 270-272 Só vagy bázis: 00 bázis 10* hidroklorid 14 maleát (b); bomlás A találmány szerinti vegyületekkel számos farmakológiái próbát hajtottunk végre, melyek terápiás hatékonyságukat igazolják. Toxicitás A heveny mérgezőképességet CDL törzsű egereken határoztuk meg grafikus eljárással. A legtöbb vegyület LD5Ű értéke (a halálos dózis 50%-a) nagyobb 1000 mg/kg-nál, intraperitoneálisan adva és 10 és >1000 mg/kg között változik orális alkalmazás esetén. Depresszióellenes hatás Megvizsgáltuk a találmány szerinti vegyületek hatását 3H-triptaminnak a patkány teljes kortexéhez (agykéreg) való kötődésére. 150 -200 g-os hím Sprague-Dawley patkányokat használtunk. A nyakcsigolya diszlokációja után kimetszettük az állatok agyát és a kortexet jéggel lehűtött tenyésztő edényen szétvágtuk. A szövetet 50 ml pufferelegyben (50 mM Ti^sz-(trisz/hidroxi-metil/-amino-meián), pH = 7,0, 25lC, 5 mM aszkorbinsav és 230 °M pargilin) homogenizáltuk Polytron^ homogenizáló készülékben (15 sec a 6 os sebességi fokozaton), és 10 percig 4°C-on 48000 x g gyorsulással centrifugáltuk. Az üledéket 50 ml pufferrel hígítottuk, ismét centrifugáltuk majd az üledéket 19 ml pufferben sxuszpendáltuk. __ A membránszuszpenzió alivot részét (150 Ml 0,3 mg fehérje) 60 percig 0°C-on 3H-triptaminna1 (fajlagos aktivitás 1 46 . 1012 Bq/millímól (39,5 Ci/milliinól/) ínkubáltuk 1 ml végtérfogatban, frissen előállított puffert használva. Inkubálás után az anyagot Whatman GF/B üvegrostszú'rőn gyorsan átszűrtük a szűrőket 3x4 ml pufferrel mostuk megszárítottuk és radioaktivitásukat folyadékszcintillációs készülékben lemértük. A membránokhoz való specifikus kötődést a 10 iM jelzetlen triptaminnal és anélkül mért radioaktivitás különbsége adja meg. A vizsgálandó vegyületek kiszorító hatásának vizsgálatánál a 3H-triptamin koncentrációja 3,3 nM, és a vizsgálandó vegyületek különböző koncentrációit használva grafikusan meghatároztuk az IC50 koncentrációt, azaz a vizsgált vegyület azon koncentrációját, amely 50%-kal gátolja a 3H-triptamin specifikus kötődését,-E A találmány szerinti vegyületek IC50 koncentrációja többnyire 0 5 /aM volt, és egyes vegyületeknél kisebb 0 05 /tM-nál. Ugyancsak megvizsgáltuk a találmány szerinti vegyületek hatását a patkány teljes kortexéhez való 3H-impramin kötődésre. 30 A szövetet a következőképpen preparáltuk: a) Homogenizálás 50 térfogat (per gramm szövet) inkubáló pufferben, majd centrifugálás -10 percig 2000 ford/min sebességgel. b) A centrifugálás után kapott üledéken megismételjük a fenti műveletet. 35 c) A végső üledéket felvettük 33 térfogat (per gramm szövet) inkubáló pufferben (30 mg szövet per ml szuszpenzió). Az inkubáló puffer literenként 120 millimól nátríum-kloridot 50 millimól Triszt és 5 millimól kálium-kloridot tartalmazott, és 0°C-on pH-ja 7,4 40 volt A teljes kötődés meghatározása céljából minden inkubációs csőbe bemértünk. 100 Ml kortexmembrán szuszpenziót (30 mg per ml) 150 gil puffert és 50 Ml 3H-imipramint. A nem-specifikus kötődés meghatározásához minden csőbe bemértünk 100 Jil kortex-membránt (30 mg per ml), 140 /Ul puffert, . 10 Ml dezipramint (30 10-4 mól per liter) és 5Q 50 Ml 3H-imipramint. A vizsgálandó vegyületek általi kiszorítás vizsgálatához a 3 H-imipramijLkoncentrációja 2,5 nM és a hatóanyagoké 0-100 juM volt. Az inkubálást 0 Con végeztük. A találmány szerinti vegyületek aktivitásának értékelése céljából a 55 3H-imipramin specifikus kötődésének gátlási %-át a kiszorító hatóanyag koncentrációjának függvényében ábrázoltuk. Az IC5o az a kiszorító hatóanyagkoncentráció amely 5()%-kaI gátolja a 3H-imipramin kötődését (grafikus meghatározás) 2,5 nM 3H-imipraminkoncentrációnál. 60 A találmány szerinti vegyületek 1CS0 értéke leg-6
