192244. lajstromszámú szabadalom • Eljárás indikátor-csíkok előállítására glükóznak vérben történő meghatározásához
1 192 244, 2 tása után a fermentumok, a zselatin és a fenti impregnált hordozó oldatából pasztát készítünk. . A pasztát óvatosan homogenizáljuk, majd fúvóka segítségével felvisszük a polimer hordozóanyagra, amelyet ezután szárítunk. Végül a csíkokat a kívánt 5 méretre daraboljuk. A Pénicillium vitale Pidopl. et Bilai törzsből izolált glükóz-oxidáz előnyös módon különbözik más" típusú termékektől, mivel specifikus aktivitását széles pH-tartományon belül (pH = 5-8) kifejti, ami- 10 kor is a maximális aktivitás a vér fiziológiás pH-, értékén mérhető. További előnye, hogy nem tartalmaz kataláz szennyeződést, ami katalizálja a hidrogénperoxid bomlását és így zavarja a glükóz-tartalom meghatározását. A Pénicillium vitale törzsből 15 nyert glükóz-oxidáz aktivitásának elvesztése nélkül hosszú időn keresztül tárolható. (Lásd az 1. táblázatot.) 1. táblázat 20 Kiindulási törzs Kiindulási aktivitás (egység)* Tárolási idő (év) Aktivitás a tárolás végén (egység) Az aktivitás megőrzése (X) Pénicillium vitale 130,0 2,0 129,0 98 Pidolp et Bilai 130,0 7,0 124,0 96 Aspergillus niger 61,2 1,0 47,9 77 61,2 7,5 26,6 42 * ** egy egység glükóz-oxidáz = 22,4 ni oxigén felhasználás 1 perc alatt optimális körülmények között. 1. példa Karboximetil-cellulózból készített papírt 2%-os etilalkoholos o-tolidin-oldattal impregnálunk, majd az oldószer teljes eltávolításáig szárítjuk, végül az alábbi összetételű oldattal impregnáljuk: Glükóz-oxidáz Pénicillium vitale-ből 300 ml 0,5%-os oldat Peroxidáz 100 ml 0,1 %-os oldat Zselatin 500 ml 4%-os oldat Viz kiegészítve 1 literre. A kapott terméket szobahőmérsékleten szárít- 45 juk, csíkokra vágjuk és kétoldalú ragasztófólia segítségével triacetát-cellulóz filmen rögzítjük. 2. példa •Aprított karboximetil-cellulózt 1 %-os alkoholos o-tolidin-oldattal impregnálunk 1:3 súlyarány mellett. Az oldószert 40-60 *C közötti hőmérsékleten kevertetés közben eltávolítjuk. 150 ml 0,5%-os glükóz-oxidáz (Pénicillium vitale) oldatot és 50 ml 0,1 %-os vizes peroxidáz oldatot elkeverünk. A kapott keverékhez kevertetés közben 200 ml 4%-os zselatinoldatot öntünk és 80 g o-tolidinnal impregnált karboximetil-cellulóz port adagolunk hozzá. A keveréket óvatosan átkeverjük és triacetát-film hordozón elterítjük. Szárítás után kívánt méretű csíkokra vágjuk. 3. példa 80 g por alakú karboximetil-cellulózt (foszfátcellulózt) 120 ml 2%-os alkoholos o-tolidin-oldattal impregnálunk, jól keverjük és 150 ml 0,5%-os glükóz-oxidáz (Pénicillium vitale) oldatot, valamint 50 ml 0,1 %-os vizes peroxidáz oldatot adunk hozzá: A kapott keverékhez kevertetés közben 200 ml 40 25 °C hőmérsékletre melegített 4%-os vizes zselatin oldatot adagolunk. Óvatosan átkeverjük és fúvókával triacetát-filmből készített hordozóra visszük fel. 30-40 *C hőmérsékleten 4-6 órán keresztül szárítjuk, majd a kívánt méretre daraboljuk. 30 A megadott módszerrel előállított indikátorcsíkok felhasználhatók a glükóz koncentráció teljes vérben történő meghatározására 1-40 mmól/liter glükóz koncentrációtartományon belül. Különböző glükóz koncentrációjú vérmintákat 35 vizsgáltunk az alábbi módszer szerint: Az indikátor-csíkokra azonos vér-réteget vittünk fel, 60 másodpercen keresztül állni hagytuk, a vért desztillált vízzel lemostuk és az indikátor-csíkot szűrőpapírral szárítottuk. Ezután a csíkot T-tartományban (erő- 40 sítés 8-10) működő spektrálfotométer kamrájába helyeztük, és megmértük a reflekció %-át. Minden mérést 5 csíkon ismételtünk meg. A kapott eredményeket a 2. táblázat tartalmazza. 2. táblázat Glükóz-koncentráció mól/1 0 4,2 6,2 8,3 10,8 16,6 18,5 T (%) 73 ±3,2 62 ±4,3 58 ±1,7 55 ±1,4 43 ±2,3 31 ± 1,6 25 ±2,1 55 Párhuzamosan meghatároztuk a vér glükóz koncentrációját a glükóz-oxidáz módszerrel. A kapott eredmények igazolják annak lehetőségét, hogy a glükóz koncentrációt a teljes vérből széles koncentrációhatárokon belül a vér előzetes kezelése nélkül határozzuk meg. A találmány szerinti eljárás indikátor-csíkok előgQ állításának egyszerűsítését, minőségük javítását és felhasználhatósági idejük növelését jelenti. 3
