192234. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új izoxazolokinolinon-származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 192 234 2 Hordozóanyag: laktóz, keményítő, talkum, magnézium-sztearát. Farmakológiai vizsgálatok 1. Benzodiazepin-receptorokhoz való affinitás A vizsgálatot Mohler és Okada által a Science, 198, 849-851 (1977) helyen ismertetett módszerrel végeztük. 150 g súlyú him patkányok agykérgét homogenizáltuk huszadrésznyi (tömeg/térfogat) 0,32 mólos szacharózban, majd 0 °C-on 10 percig centrifugáltuk 1000 g-vei, a felülúszót 4 °C-on 20 percig centrifugáltuk 30 000 g-vel. A maradékot 20-szoros térfogatú Trisz-HCl-pufferben (50 mmól, pH = 7,4) szuszpendáltuk, és 4 °C-on 20 percig centrifugáltuk 30 000 g-vel. A kapott maradékot 50 ml Krebs Trisz-HCl-pufferben (pH = 7,4) szuszpendáltuk. 2 ml szuszpenziót 10-9 mól 3 * *H-diazepam jelenlétében 0 °C-on 30 percig inkubáltunk : I) önmagában, II) a vizsgált vegyület emelkedő mennyiségeivel, III) 10~6 mól nem-radioktiv diazepam jelenlétében a nem-specifikus kötődés meghatározására. Az inkubált szuszpenziókat Whatman GF/C szűrőn leszűrtük, a szűrőket kétszer 5 ml Krebs Trisz-HCl-pufferrel (pH = 7,4, 0 °C) mostuk. A szűrők radioaktivitását folyadék-szcintillációval mértük. Az aktivitást C.I.50 értékekben fejeztük ki: a 3H-diazepam specifikus kötődésének 50%-os koncentráció gátlása. A következő eredményeket kaptuk : Termék C. I. 50 (példaszám) (nmól) 1. 120 2. 400 4. 2460 2. Akut toxicitás vizsgálata A vizsgált vegyületek LD0 letális dózisát egerek nek orális úton adagolva határoztuk meg. LD0 értéknek azt a maximális dózist neveztük, amely 8 napon belül nem okoz pusztulást. A következő eredményeket kaptuk : Tennék r D O (példányszám) (mg/kg) 1. >400 2. £400 3. £200 4. 200 5. £200 7. £100 3. A vegyületeknek a vér kortikoszteron-szintjére kifejlett hatása zajokozta stressz után A vizsgálat előtti napon patkányok 5 egyedből álló csoportjait csendes szobába helyeztük. A vizsgált vegyületeket orálisan adagoltuk reggel 8 és 9 óra között. Ezután egy órával az állatokat stresszhatásnak tettük ki: olyan szobába helyeztük át őket, ahol a rádió 90 decibel erősséggel szólt, majd egy félórával később intraperitoneális szúrást adtunk nekik, injekció nélkül. Ezután 10 perccel a/, állatokat halothannal elaltattuk, lefejezéssel vérmintát vettünk tőlük, és meghatároztuk a vér korti- 5 koszteron-szintjét. Az eredményeket DES0 értékekben fejeztük ki, amely a vizsgált vegyületnek azt a dózisát jelenti, amelynél a kezelt állatokban a vér kortikoszteronszintjének emelkedése 50%-kal csökken a kontroll 10 állatokhoz képest. A következő eredményeket kaptuk : Termék de50 15 (példaszám) (mg/kg) 2. 50 4. 100 \ stresszhatás kevésbé figyelhető meg a kezelt állatoknál, ezeknél az állatoknál tehát a félelem szintje alacsonyabb, mint a kontroll állatoknál. 25 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás (I) általános képletű izoxazolokinolinon-származékok előállítására - a képletben R jelentése hidrogén-, fluor-, klór- vagy brómatom, 1-5 3Q szénatomos egyenes, vagy 3-5 szénatomos elágazó szénláncú alkilcsoport, 1-5 szénatomos alkoxicsoport, nitro- vagy trifluormetil-csoport, Rj jelentése adott esetben 1-5 szénatomos egyenes, vagy 3-5 szénatomos elágazó szénláncú alkilcsoporttal, vagy 35 halogénatommal helyettesített fenilcsoport -, azzal jellemezve, hogy a) egy (II) általános képletű vegyületet - ahol Alk jelentése metil-, etil- vagy propilcsoport, X jelentése klór- vagy brómatom, R jelentése a tárgyi kör sze-40 rinti- egy (III) általános képletű hidroxilaminnal reagáltatunk- ahol R' jelentése hidrogénatom vagy megegyezik az R,-nél megadott fenilcsoport adott esetben je-45 lenlevő, fent felsorolt helyettesítőivei -, vagy b) egy (IV) általános képletű vegyületet - ahol R jelentése a tárgyi körben megadott -, előnyösen a halogenidje alakjában, egy (III) általános képletű hidroxilaminnal reagáltatunk - ahol R'jelentése az a) eljárásnál megadott -, és egy kapott (V) általános képletű vegyületet - ahol R és R' jelentése a fenti- ciklizálunk. 2. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás, azzal jellemezve, hogy (II) általános képletű vegyületként R helyén hidrogén- vagy klóratomot tartalmazó s vegyületet használunk. 3. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás, azzal jellemezve, hogy (II) általános képletű vegyületként R helyén higrogénatomot tartalmazó vegyületet, és (III) általános képletű vegyületként R' helyén hid-60 rogénatomot tartalmazó vegyületet használunk. 4. Az 1. igénypont szerinti b) eljárás, azzal jellemezve, hogy (IV) általános képletű vegyületként R helyén 6-helyzetű hidrogén- vagy fluoratomot vagy metoxicsoportot tartalmazó vegyületet, és 65 5
