192185. lajstromszámú szabadalom • Enzimkatalizátor készítmény digitális lanata primer glikozidjainak szekunder glikozodokká történő átalakítására
1 192 185 2 perc sebességgel ETA-012 típusú mixerben 3 percig turmixolunk. Ily módon homogenizátumot kapunk. A homogenizátumot 30 percig 10 000 gyorsulással centrifugáljuk és a felülúszót alkalmazzuk katalizátorkészítményként. A homogenizátumot vagy a felülúszó katalizátorkészítményt rövid időn belül fel kell használni, ezért előnyösebb mindkettőt fagyasztott állapotban tárolni, ily módon ugyanis több hónapon át aktív állapotban marad. Igen előnyös készítményt oly módon állíthatunk elő, ha a homogenizátumot, vagy a felülúszót egy ismert módszerrel liofilizáljuk, ebben az esetben a készítmény aktivitását legalább egy évig megőrzi. b) Lanatozid-C digoxinná való enzimkatalitikus átalakítása. Lanatozid-C kristályokból etanolban 10 mg/ml koncentrációjú törzsoldatot készítünk, amelyet vízzel és annyi Trisz-puffer és sósav oldat elegyével vagy citrát-puffer oldattal hígítjuk, hogy a lanatozid-C oldat végkoncentrációja 0,5 mg/ml, pH-értéke 5 legyen. 1 ml reakcióelegyhez ezután 100 pl, az a) pont szerint frissen készített Helix pomatia felülúszó enzimkatalizátor készítményt adunk és 37 °C hőmérsékleten 1 órán át inkubáljuk. A reakcióelegyből mintát veszünk és az átalakulást vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel vizsgáljuk. Az átalakulás 100%-os, Az átalakulási folyamatot az alábbi módon detektáljuk: szilikagél vékonyréteg lemezre (Merck 5553 DC Alufolien Kieselgel 60) 50 pl-nyi mintákat viszünk fel és diklór-metán : metanol : desztillált víz 85 : 13,5 : 1,5 arányú elegyében szobahőmérsékleten futtatjuk a lemez teljes magasságáig. A lemezt antimon-triklorid 25%-os kloroformos oldatával lefújjuk, majd 5 percen át szobahőmérsékleten tartjuk. Az előhívott foltokat videodenzitometráljuk TV-kamerás detektáláson alapuló videodenzitometriás műszeren (Telechrom-S). A glikozid-tartalmat kalibrációs görbén határozzuk meg. A reakcióelegyből a digoxint egy ismert módszerrel (például a 149 778. számú magyar szabadal- 5 mi leírásban ismertetett eljárással) nyerjük ki. c) Digitalis lanata levélben jelenlévő primer glikozidok szekunder glikoziddá történő enzimkatalitikus átalakítása. Szárított Digitalis lanata levelek őrleményét há- 10 romszoros mennyiségű, pH = 5 értékű citrátpuffer oldatban ETA-012 típusú mixerben 5 percig n = 10 000 fordulatszámmal megőröljük, ezután Vto térfogatnyi, az a) pont szerint készített, felülúszó enzimkatalizátort adunk hozzá, majd a rend- 15 szert egy órán át 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk, majd a b) pontban ismertetett módszerrel a szekunder glikozidokat meghatározzuk. Az enzímkatalitikus átalakítás előtti, majd az utáni oldatok vizsgálati eredményeit összevetve megállapítható, hogy a primer glikozidok 100%-ban szekunder glikozidokká alakultak át. Szárított Digitális lanata levelek helyett kiindulhatunk frissen szedett, szikkasztott fóliumból is, az enzimkatalitikus átalakitás révén minden esetben 25 teljes a szekunderesedés. A szekunder glikozidok arányát a kiindulási levélben jelenlévő primer glikozidok szabják meg. 30 Szabadalmi igénypont Enzimkatalizátor készítmény a Digitalis lanata glikozidjainak szekunder glikozidokká történő átalakítására, azzal jellemezve, hogy enzimkatalizá- 35 torként a házától megfosztott Helix pomatia (éticsiga) egész testének 5-50%-os vizes őrleményét (homogenizátumát) tartalmazza szuszpenzióban vagy a szilárd részektől mentesített oldatban (kivonatban), friss vagy mélyhűtött állapotban, kívánt 40 esetben liofilizátum formájában. 2 oldal rajz Kiadja az Országos .Találmányi Hivatal A kiadásért felel : Himer Zoltán osztályvezető Szedte a Nyomdaipari Fényszedö Üzem (878398/09) 89-0010 — Dabasi Nyomda, Budapest — Dabas Felelős vezető: Bálint Csaba igazgató 4
