192162. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 47934 jelű antibiotikum előállítására
1 192 162 2 A titrációs eredmények azt mutatják, hogy az A 47 934 jelű antibiotikum könnyen képez bázisokkal sókat. A pH 3 vagy ez alatti kémhatású erős savakkal szintén képez sókat az antibiotikum. Az A 47 934 fajlagos forgatóképessége, [a]“’ = - 1,99 • (H20, C = 10 mg/ml). Az A 47 934 jelű antibiotikum KBr-ban felvett infravörös abszorpciós spektrumát az 1. ábrán mutatjuk be. A következő megkülönböztető abszorpciós csúcsok figyelhetők meg: 3700-2700 (nagyon széles, intenzív), 1658 (erős), 1615 (közepes), 1590 (közepes), 1510 (közepes), 1491 (közepes), 1472 (gyenge), 1429 (közepes), 1398 (közepes), 1326 (nagyon gyenge), 1265 (közepes), 1231 (erős), 1205 (gyenge), 1005 (közepes), 849 (közepes), 754 (gyenge) és 719 (gyenge) cm-1. Az A 47 934 jelű antibiotikum ultraibolya spektrumának maximuma mind savas, mind semleges vizes oldatban 281 nm-nél van (e = 10 850). Az A 47 934 antibiotikum lúgos vizes oldatának ultraibolya spektruma 297 nm-nél mutat maximumot (£ = 18 900). Az A 47 934 jelű antibiotikus hatású anyagot ez ideig le nem írt Streptomyces toyocaensis NRRL 15 009 törzs tenyészetével állítjuk elő. Ezt a tenyészetet laboratóriumokban az A 47 934.1 kultúraként jelöltük meg. Az A 47 934.1 kultúra az A 47 934 kultúrából származik természetes szelekcióval, mint annak variáns törzse. Az A 47 934 kultúrát eredetileg a Washington állam-beli Clayton Bayban gyűjtött apályos homokmintából izolálták. Találmányunkban az antibiotikus hatású anyagot A 47 934 antibiotikumnak jelöljük. Az A 47 934.1 kultúrát a Streptomyces toyocaensis egyik törzsének határoztuk meg a Streptomyces griseoflavus ATCC 25 456 Shirling és Gottlieb által közzétett leírásával (Cooperative description of type cultures of Streptomyces, Int. J. Syst. Bacteriol., 79(4), 391-512, (1969), valamint a Streptomyces toyocaensis Nishimura, Katagiri, Sato, Mayama és Shimaoka, ATCC 19 814 Shirling és Gottlieb által közölt leírásával (Cooperative description of type cultures of Streptomyces., Int. J. Syst. Bacteriol., 18(2) 174, (1968) való összehasonlítás és bizonyos kiegészítő vizsgálatok alapján. Az A 47 934.1 spóratömegének színe a szürke (GY) színsorozathoz tartozik, ami különbözik a Streptomyces griseoflavus spóratömegének Waksman által sárgás-szürkésnek leírt színétől [The Actinomycètes, II. kötet, 222. old., The Williams and Wilkins Co., Baltimore, (1961)]. További különbség, hogy a Streptomyces griseolflavus hasznosítja a mannitot és a ramnózt, az A 47 934.1 viszont nem. Az A 47 934.1 morfológiailag, fiziológiailag és a tenyészet sajátosságait illetően hasonló a Streptomyces toyocaensis Nishimura, Katagisi, Sato, Mayama és Shimaoka ATCC 19 814-hez. Az A 47 934.1 törzs leírását és jellemzését az alábbiakban írjuk le. Morfológiája : Az A 47 934.1 törzs jól fejlett, nem-fragmentált, monopódiálisan elágazó légmicéliumokat fejleszt. A spóratartók nyitott, rövid, 2-3 kanyarulatú laza spirálisokban helyezkednek el, ezért az A 47 934.1 törzset Pridham és munkatársai rendszerében a Spira (S) csoportba soroljuk [A guide for the classification of Streptomyces according to selected groups., Appl. Microbiol., 6, 52-79, ,1957)]. Az ismertetett morfológia legjobban az 1SP2 és az ISP3 táptalajokon figyelhető meg. Az érett spórafüzér rendszerint 10-50 spórát tartalmaz füzérenként. A spórák alakja nyújtottól oválisig változik, felületük tüskés. A spórák 0,58-0,71 pm szélesek, 0,75-0,88 pm hosszúak; átlagméretük: 0,65 pm szélesség és 0,83 pm hosszúság. Az A 47 934.1 kultúra különböző táptalajon mutatott növekedési sajátosságait a 2. táblázatban foglaljuk össze. A színek meghatározásánál az ISCC-NBS Centroid Color Chars Sample No. 2106 (National Bureau of Standards, U.S. Department of Comerce, (1958) és a Color Harmony Manual,) 4. kiadás (Color Standards Department, Container Corporation of America, Chicago, Illinois,) (1958), összehasonl tó mintáit vesszük figyelembe. 2. táblázat Különböző táptalajon nőtt tenyészetek jellemzői Táptalaj Jellemző tulajdonságok élesztc kivont tos-maláta kivonatos agar (ISP2 táptalaj) N: erőteljes F: 68.S.OY LM : jól fejlett, 2ih light olive gray OP: nincs N: jó F: 91.d.gy.Y zablis/tes agar LM : jól fejlett, 2ih light olive gray OP: nincs N : erőteljes szervetlen F: 94.1.01 Br sós-keményítős agar LM : erőteljes, 2ih light (ISP4 táptalaj) olive gray OP: nincs N : erőteljes Glicerines-aszparagi-F: 67.brill.OY nos agar (ISP5 LM : jól fejlett, 2ih light táptalaj) olive gray OP: nincs N: jó Czapck-féle agar F: 91.d.gy.Y LM : jól fejlett, 2ih light olive gray OP: nincs N: erőteljes Paradicsom F: 94.1.01 BR pasztás-zablisztes LM : erőteljes, 2ih light agar olive gray OP: nincs N = növekedés F = fonák LM = légmicélium OP = oldható pigment Az A 47 934.1 és a Streptomyces toyocaensis ATCC 19 814 szénhasznositásánaic összehasonlítását ISP9 alaptáptalajon végeztük, melyhez az egyes 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
