192088. lajstromszámú szabadalom • Eljárás felületaktívanyag-hiány következtében fellépő légszomj kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmény előállítására
1 előnyösen t ;4 arányú. Az anyalúgot szűréssel vagy centrifugé lássál elválasztjuk és a szilárd fázist előnyö; sen —10-----20°C hőmérsékletre temperált acetonnal mossuk, majd a foszfolipidfrakciót megszárftjuk. Az így előállított majdnem fehér színű anyagot, amely 70-90%-ban foszfolipidből áll és amely a korábban megadott kísérletben semmilyen biológiai aktivitást nem mutat, hozzáadjuk az alkoholos extrakcióval elválasztott felületaktív-anyaghoz. Az így keletkezett megszárított keveréknek az őszszetétele a következő: (a módszer megfelel a már megadott eljárásnak) foszfolipid 60—75% neutrális lipid 5—15% koleszterol 10—20% protein 0,5—1,5% szabad zsírsav 2— 5% A foszfolipidek összetétele a következő: foszfolipid-kolin 60—70% foszfatidil-glicerol 2— 4% foszfatidil-etanol-amin 5—10% foszfatidil-szerin 1— 3% szfingomielin 10—20% foszfatidil-inozit 2— 3% Ezzel az eljárással előállított készítmények nagy ‘ hatékonyságot mutatnak ill. táblázat) a mér megadott in vivo állatkísérleti vizsgálatokban és kivétel nélkül jót kompatibilisek intratracheális csepegte térnél. Az ismételt alkoholos extrakcióval és acetonos kicsapással előállított foszfolipidfrakciókat is hasonló módon alkalmazhatjuk. A gyógyászati készítmény előállítása: Az előállított természetes felületaktív-anyagból, amelynek foszfolipidtartalma 40-70%, a következőkben leírt eljárással gyógyászati készítményt állítunk elő. Az anyagot etanolban vagy halogénezett szénhidrogénben üvegszűrő és szűrőpapír felett feloldjuk, majd előhűtjük és ezután oldószernek ellenálló membránon sterilen leszűrjük. Az oldószert vákuumban bebepároljuk, majd a keletkezett maradékot az injektálásnoz vízzel vagy steril vizes oldattal emulgeáljuk, majd üvegedénybe töltjük, lefagyasztjuk és tiofitizáljuk. Vizes olatként alkalmazhatunk Izotonikus nátrium-klorid vagy kálcium-klorid oldatot, illetve mono- és diszaharidok izotonikus oldatait. Homogenizálásre előnyösen megfelelő egy Ultra-Turrax. Ezenkívül megfelelő szereket is adagolhatunk hozzá, olyanokat, amelyekkel javítjuk az emulgeáló képességet, növeljük a stabilitást és a meghatározott pH-tartományt pufferoljuk. Gyógyászati készítmény előállítására egy másik lehetőség, hogy a kitermelt természetes felületaktívanyagot — elkerülve a szerves oldószeres steril szűrést — rögtön emulgeáljuk vízben vagy vizes oldatokban, amikoris ugyanúgy érvényesek a már megadott oldatok és adalékok, majd az emulziókat autoktávban kezeljük. Az elegyet lehűtjük és amennyiben szükséges, akkor mégegyszer emulgeáljuk. Ezt követően az emulziót az üvegedényekbe töltjük, lefagyasztjuk ét liofitizáljuk. 2 Kivitelezési példák 1. példa 4,1 kg friss szarvasmarha tüdőből eltávolítottuk a zsírszövetet a nagyobb trachea részeket, valamint a megtapadt vért és közben felaprítottuk a tüdőt. Ezt követően a tüdődarabokat 4 mm-es lyukú húsdarálóban felaprítottuk és az így kapott 3,5 kg darált húst egy órán keresztül, 20 C hőmérsékleten, 14 I izotonikus nátrium-klorid oldattal extraháltuk, miközben intenzíven kevertük az elegyet. Dederon gézen átszivattuk és így 12,4 I zavaros extraktot kaptunk, amelyet 20°C hőmérsékleten egy óráig kevertünk 7,6 I kloroformmal. Három napos állás idő után a keletkezett finom protein csapadékot 2 000 g-n 15 perc alatt lecentrifugáltuk. így 5,8 1 tiszta kloroformos fázist kaptunk, amelyet rotációs vákuumbepárlóban betömény(tettünk és nitrogén-gázban szárazra pároltuk. 6,14 ganyagot állítottunk elő. 2. példa 200 kg tüdőből eltávolítottuk a zsírszövetet és a nagy trachea részeket és 8 mm-es lyukú húsdarálóban felaprítottuk. A darált húst 30 percig 17°C hőmérsékleten 600 I izotonikus nátrium-klorid oldattal kevertük egy ipari extraktorban. 15 perces állási idő után összegyűlt a vizes fázis felett a tüdő túlnyomó része. Ezt leszívattuk az extraktor aljáról és egy szeparátorral eltávolítottuk a még jelenlevő tüdőrészeket és a vérsejteket. A 410 I vizes extraktumot tovább feldolgoztuk egy 200 l-es Kipp üstben. Kétszer összekevertünk 130 I extraktumot 1,1—1,1 kg vízmentes kálcium-kloriddal és 25 percig kevertük 15°C hőmérsékleten 32—32 I kloroformmal (2. orvosi könyv, DDR) és egyszer 25 percig összekevertünk 150 I extraktumot 1,2 kg vízmentes kálciumkloriddal és 36 I kloroformmal (2.orvosi könyv DDR) Egy éjszakai állás után a felső vizes fázisokat és ezzel a kivált fehérjék egy részét dekantáltuk és a maradékot centrifugával elválasztottuk. 60 I kloroformos fázist kaptunk, amelyet vákuumbepárlóval és az ezt követő rotációs vákuumbepárlóval betöményítettünk. Nitrogén-gázzal lehajtottuk az oldószer-maradékot. 513 g anyagot állftottunk elő. 3. példa 2,0 kg karált tüdőt, amelyet az 1. példa szerint 2,2 kg szarvasmarha tüdőből állítottunk elő, 60 percig, 20°C hőmérsékleten kevertünk 5,0 I kloroformmal. A tüdő leszűrése után rotációs bepárlóval betöményítettük a kloroformos extraktumot és nitrogén-gázban szárazra pároltuk. 2,84 g anyagot állítottunk elő. 4. példa 276 kg friss szarvasmarha tüdőből elválasztottuk a zsírszövetet és a trachea részeket és 8 mm-es ipari húsdarálóban felaprítottuk. Az így kapott 250 kg darált tüdőt 60 percig, 22UC hőmérsékleten kevertük 300 ) kloroformmal ipari extraktorban. A kloroformos fázist 50 perces állási idő után leengedtük, vákuumbepárlóval és rotációs vákuumbepárlóval töményltettük és nitrogén-gáz bevezetésével beszárítottuk-. 950 g anyagot állítottunk elő. 192.088 5 10 15 20 25 30 36 40 V 45 50 55 60 5
