191991. lajstromszámú szabadalom • Eljárás merkapto-ecetsav-amid- és 3-merkapto-propionsav-amid-származékokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
7 191991 8 15,1 g A) lépésben kapott termék és 500 ml diklór-etán -35 °C-ra hűtött oldatához keverés közben, argonatmoszférában, 30 perc alatt 16,5 ml anilin 500 ml diklór-metánnal készült oldatát adagoljuk, az adagolás befejezése után az elegyet szobahőmérsékletre melegedni hagyjuk, és 16 órán át keverjük. A kivált anilin hidroklorid csapadékot kiszűrjük, és a szűrletet előbb 0,1 n sósavval, majd vízzel mossuk (semleges kémhatás eléréséig). A szerves fázis mosásához felhasznált vizet kétszer diklór-metánnal ismét extraháljuk, a szerves fázisokat egyesítjük, szárítjuk, szűrjük, és az oldószert vákuumban lepároljuk. így 21,5 g nyers terméket kapunk, amelyet 250 ml pentánnal alaposan átdolgozunk. A csapadékot szűrjük, pentánnal mossuk, és vákuumban megszárítjuk. így 20 g hozammal jutunk a B) lépés, azaz a 2. példa cím szerinti vegyületéhez, op.: 99 °C. 3. példa S-[ 3- (4-Klór-fenil-amino )- 3-oxo-propil]-etán-tioát előállítása 15,7 g 2. példa A) lépésében készült termék és 250 ml diklór-metán -35 °C-ra hűtött oldatához keverés közben, argonatmoszférában, 45 perc alatt 4-klór-anilin 250 ml diklór-metánnal készült oldatát adagoljuk, majd az elegyet 27 órán át keverjük, és szobahőmérsékletre felmelegedni hagyjuk. A képződött 4-klór-anílin hidrokloridot kiszűrjük, és a szűrletet előbb 0,1 n sósavval, majd vízzel mossuk (semleges kémhatásig). A szerves fázist megszárítjuk, az oldószert vákuumban ledesztilláljuk, az így kapott kristályos terméket diklór-metánban oldjuk, aktívszénnel derítjük, szűrjük, diklór-metánnal mossuk, majd az oldószert vákuumban lepároljuk. Az így kapott 24,5 g nyers terméket 100 ml dietil-éter és 70 ml pentán elegyével alaposan átdolgozzuk, a csapadékot kiszűrjük és 6:4 arányú éter-pentán keverékkel ismét átdolgozzuk. A csapadékot kiszűrjük, és vákuumban bepároljuk. így 22 g hozammal kapjuk a 3. példa cím szerinti termékét, op.: 103 °C. 4. példa S- [ 2- ( 2-Tiazolil)-amino- 2-oxo-etil]-etán-tioát előállítása 10 g 2-amino-tiazol, 70 ml etil-acetát és 20,8 ml trietil-amin elegyéhez hűtés közben, 20-30 °C hőmérsékleten, 20 perc alatt 18,24 g 2-(acetil-tio)-acetil-klorid és 20 ml etil-acetát oldatát adagoljuk (e savkloridot a Chem. Abstr. 41, 1702 (1947) ismerteti és a 2 412 700 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásban közölt eljárással állítjuk elő). Az elegyet 2 órán át szobahőmérsékleten tovább keverjük, majd szűrjük, a csapadékot etil-acetáttal mossuk, és az így kapott szilárd terméket 150 ml vízzel elkeverjük. Az oldhatatlan csapadékot kiszűrjük, vízzel mossuk, szűrjük, és vákuumban megszárítjuk. így 19,3 g nyers terméket kapunk, ezt etil-acetátból átkristályosítva 10,4 g hozammal jutunk a 4. példa cím szerinti termékéhez, op.: 183 °C. 5. példa Tablettákat állítunk elő a következő módon: N-(4-Klór-fenil)-2-mer~ kapto-ecetsav-amid 50 mg Vivőanyag, amennyi szükséges 350 mg-hoz (Vivőanyag: laktóz, talkum, keményítő, magnézium-sztearát. ) 5. példa Tablettákat állítunk elő a következő mólon: N- ( 2- Tiazolil )- 2- merkapto-ecetsav-amid 200 mg Vivőanyag, amennyi szükséges 350 mg-hoz (Vivőanyag: laktóz, talkum, keményítő, magnézium-sztearát.) A BIOLÓGIAI HATÁSOK VIZSGÁLATA 1. Az enkefalináz enzim aktivitásának kiértékelése és a hatóanyagok gátló hatásának meghatározása Az enkefalináz aktivitását patkány striatum-ából készített membránfrakcióban határoztuk meg. A striatumot jéggel hűtve eltávolítjuk, és 7,4 pH értékű, hússzoros térfogatú 0,05 mólos TRIS-pufferoldatban homogenizáljuk. Ezután 1000 g sebességgel centrifugáljuk, majd a részecskéket tartalmazó frakciót két, egyenként 10 percig taftó, 20 000 g sebességű centrifugálással kapjuk. A centrifugakalácsot TRIS-pufferban szuszpendáljuk, és 4 °C hőmérsékleten tartjuk. A fehérjék kiértékelését a Commasie-kék módszerrel végezzük. 15 percen át tartó, 25 °C hőmérsékletű előinkubálás után a fehérjéknek egy alikvot részét 15 percig 25 °C hőmérsékleten 20 nanomól, előzőleg tisztított olyan leucin-enkefalin jelenlétében, amely az első aminosavkomponensén tríciummal jelezve van, továbbá 1 millimól puromicin és a vizsgálandó anyag jelenlétében TRIS-pufferoldatban inkubáljuk. A 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
