191865. lajstromszámú szabadalom • Eljárás LH-RH antagonista peptidek előállítására

Példa

Az I. táblázatban feltüntetett peptidek

X-0-D-2NAL— R2 — D-Trp -Ser—Rs -R6 -Leu- Arg- Pro-R10

általános képletűek, melyeket a fentebb említett szilárd fázisú tecnikával állítunk elő:

19

I. táblázat

191 365

Példa száma

X

R,

R,

R,

R,

R10

Forgatóképesség [or]*3

(c-1,

50 %-os ecetsavban)

1.

Ac

4-F-D-Phe

Tyr

D—Arg

Leu

Gly-NH2-29,r

2.

Ac

4-F-D-Phe

Tyr 4-NH2-D-Phe Leu

Gly-NH2-44,5°

3.

Ac

4-Cl-D-Phe

Tyr

D—Arg

Leu

Gly-NH2-33,8°

4.

Ac

4-Cl-D-Phe

Tyr

D-Arg

Leu

NHCH2CH2-33,6°

5.

Ac

4—MOj -D-Phe

Tyr

D-Arg

Leu

nhch2ch3-20,1°

6.

Ac

4—Br-D-Phe

Tyr

D-Arg

Leu

nhch2ch3-23,1°

7.

Ac

4-F-D-Phe

Tyr

D-Arg

N“-Me—Leu -D-Ala-NH2-27,2°

8.

Ac

4-F-D-Phe

Tyr

D-Arg

Leu

Gly-NH2-45,53

9.

Ac

4—F—D—Phe

2—Cl—Phe

D-Arg

Leu

Gly-NH2-25,7°

10.

Bz

4-F-D-Phe

Tyr

D-Arg.

Leu

Gly-NH2-11,2°

11.

Ac

4_F-D-Phe

2—Cl—Phe

D—Arg

N“-Me-Leu

Gly-NH2

■ -46,3°

12.

Ac

4—Cl—D—Phe

Tyr

D-Arg

Leu

Gly-NH2-40,6°

13.

Ac

4—F—D—Phe

Tyr

D-Arg

Leu

nhch2ch3-28,8°

35

Példaképpen a fenti 1. számú, [Ac— D—2NAL1,

4-F-D-Phe2, D-Trp3, D-Arg6]-GnRH jelölésű pepiid jellemző szilárd fázisú szintézisét ismertetjük az alábbiakban. E peptid képlete a következő:

Lépés

40

Keverési

Reagensek és műveletek idők

(perc)

Ac-|3-D-2NAL-4-F-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr- D-Arg-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2.

45

BHA gyantát használunk, és Boc-védett Gly-t kapcsolunk a gyantához metilén-dikloridban (CH2C12) 2 óra alatt; a Boc-származékot háromszoros feleslegben alkalmazzuk és aktivátorként DCC-t használunk. A glicin-rész 53 a BHA-részhez ainidkötéssel kapcsolódik.

Minden aminosavrész hozzákapcsolása után a mosást, védőcsoportlehasítást és a következő amirtosavrész hozzákapcsolását az alábbi munkamenet szerint hajtjuk végre automatizált készüléket használva és körül- 55 belül 5 g gyantából kiindulva:

60

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

CH2C12 mosás - 80 ml (kétszer)

Metanol (MeOH) mosás — 30 ml (kétszer)

CH2C12 mosás - 80 ml (háromszor)

50 % trietanol-amin (TEA)+5 % 1,2-etánditiol CH2Cl2-ben - 70 ml (kétszer) CH2C12 mosás — 80 ml (kétszer)

12.5 % TEA CH2 Cl2 -ben - 70 ml (kétszer) MeOH mosás — 40 ml (kétszer)

CH2C12 mosás — 80 ml (háromszor) Boc-aminosav (10 millimól) 30 ml dimetil-formamidban (DMF)vagy CH2Cl2-ben, függően az illető védett aminosav oldhatóságától (egyszer), plusz DCC (10 millimól) CH2C12 -ben MeOH mosás - 40 ml (kétszer)

12.5 % TEA CH2Cl2-ben - 70 ml (egyszer)

MeOH mosás — 30 ml (kétszer)

3

3

3

3

10

3

5

2

3

30-300

4