191865. lajstromszámú szabadalom • Eljárás LH-RH antagonista peptidek előállítására
.1 191 865 2 A találmány tárgya eljárás új peptidek előállítására, amelyek emlősöknél — beleértve az embert - gátolják a hipofízis gonadotropin-termelését és alkalmasak az ovuláció gátlására és/vagy szteroid hormonok leadásának visszaszorítására. Közelebbről meghatározva a találmány szerint olyan peptideket állítunk elő, amelyek gátolják az ivarmirigyek működését és szteroid hormonok, mint progeszteron és tesztoszteron termelését. A hipofízis nyélen keresztül kapcsolódik a hipotalamuszként ismert agyalapi részhez. A hipofízis termeli egyebek mellett a follikulus-stimuláló hormont (FSH) és a luteinizáló hormont (LH), melyeket gonadotropinoknak vagy gonadotrop hormonoknak is nevezünk. E hormonok együttesen szabályozzák az ivarmirigyek funkcióját, amikor azok a herében tesztoszeront és a petefészekben progeszteront termelnek, és szabályozzák a csírasejtek termelését és érését is. Az agyalapi mirigy elülső lebenyének hormontermeléséhez általában a hipotalamuszban képződő más hormoncsoport előzetes felszabadulása szükséges. A hipotalamuszhormonok egyike gonadotrop hormonok, főleg az LH felszabadulását megindító faktorként („releasing factor”) hat, és e hormont e leírásban GnRH-nak nevezzük, bár az LH—RH és az LRF megjelölés is használatos. A GnRH-t a következő szerkezetű dekapeptidként izolálták és jellemezték: p-Glu-His-Trp-Ser—Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro- Gly-NH2. A peptidek két vagy több aminosavat tartalmazó vegyületek, melyekben az egyik aminosav karboxilcsoportja a másik sav aminocsoportjához kapcsolódik. A GnRH fenti képlete összhangban áll a peptidek szokásos jelölésével, ahol az aminocsoport a bal oldalon és a karboxilcsoport a jobb oldalon helyezkedik el. Az aminosavmaradék helyzetének azonosírása céljából az aminosavmaradékot balról jobbra menve számozzák. A GnRH esetében a glicín karboxilcsoportjának hidroxilrészét aminocsoport (NH2) helyettesíti. A fenti aminosavmaradékok rövidítései szokványosak és az aminosavak triviális nevén alapulnak, így p—Glu = piroglutaminsav His = hisztidin Trp = triptofáu Ser = szerin Tyr = tirozin Gly = glicin Leu = leucin Arg = arginín Pro = prolin Phe = fenil-alanin és Alá = alanin. Ezeket az aminosavakat a valinnal, izoleucinnal, treoninnal, lizinnel, aszparaginsawal, aszparaginnal, glutaminnal, ciszteinnel, metioninnal, fenil-alaninnal és prolinnal együtt általában szokványos, természetes előfordulású, vagy fehérje-eredetű aminosavaknak tartják. A glicin kivételével a találmány szerinti peptidek aminosavai L-konfigurációjúak, ha erre nézve külön utalás nincs. Ismeretes, hogy ha a GnRh dekapeptid 6-helyzetében a Gly-t D-aminosavak helyettesítik, a kapott peptid anyag emlősöknél mintegy 1-35-ször hatásosabban serkenti az ' 2 LH és egyéb gonadotropinok hiopofízis általi leadását, mint a GnRH. K. U. Prasad és munkatársai szerint [J. Med. Chem. 19, 492 (1976)] a nagyobb hatékonyság úgy is elérhető, hogy a 3-helyzetben 3-(l-naftil)-Ala 5 szubsztituenst alkalmazunk. E felszabadító hatás bekövetkezik, ha emlősöknek intravénásán, szubkután, intramuszkulárisan, orálisan, intranazálisan vagy intra-. vaginálisan alkalmazzák a GnRH-analógot. Az is ismeretes, hogy a GnRH dekapeptid 2-helyzeté- 10 ben a His különböző aminsavakkal való helyettesítése (vagy a His elhagyása) olyan analógokhoz vezet, melyek emlősöknél gátolják az LH és más gonadotropinok hipofízis általi leadását. Bizonyos okokból az ovuláció meggátlása kívánatos 15 nőstény emlősöknél, és az ovuláció megakadályozása céljából a GnRH normális működését antagonizáló GnRH- analógokat alkalmazzák. Emiatt széles körben vizsgálják a GnRH-antagonista GnRH-analógoknak fogamzásgátlásra vagy a fogamzási periódusok szabályozására 20 való esetleges alkalmazását. Az ilyen antagonisták hím emlősöknél is hasznosnak bizonyultak a gonadotropinok kiválasztásának szabályozására és ezért az utóbbiaknál fogamzásgátlókként alkalmazhatók. Olyan peptidek létrehozására van szükség, amelyek hatásos antagonistáí 25 az endogén GnRH-nak és amelyek megakadályozzák az LH szekrécióját és az emlősök ivarmirigyeinek szteroidtermelését. A találmány céljául annak a feladatnak a megoldását tűztük ki, hogy emlősöknél — beleértve az embert - 30 gonadotropin-felszabadulást gátló peptideket állítsunk elő, továbbá eljárást dolgozzuk ki hím és nőstény emlősök ivavmirigyei szteroid-termelésének gátlására. A tökéletesített GnRH-analógok GnRH-antagonisták és emlősöknél gátolják a szaporodási folyamatot. Ezen analógok 35 a gonadotropinok és szexuálhormonok képződésének gátlására használhatók különböző körülmények között, beleértve a korai nemi érést, hormon-dependens rosszindulatú daganatokat, menstruációs zavarokat és endometriózist. 40 Általában a találmány szerint olyan peptideket szintetizálunk, amelyek emlősöknél — beleértve az embert — erősen gátolják a gonadotropinok hipofízis általi szekrécióját és/vagy gátolják az ivarmirigyek szteroidtermelését. E peptidek olyan GnRH-analógok, ahol 1-helyzetű 45 szubsztitúció van j3-(2-naftil)-D-alanin (a továbbiakban ß- D-2NAL) formájában 3-helyzetű szubsztitúció D-Trp formájában, 6-helyzetű szubsztitúció és 2-helyzetben is szubsztituens foglal helyet, az 1-helyzetű szubsztituens úgy módosítható, hogy a-amino-csoportja acilcsoportot. 50 például formil-, acetil- vagy benzoilcsoportot tartalmaz; előnyben részesítjük az acetilcsoportot (Ac). A 2-helyzetben módosított D-Phe van jelen, ami a benzolgyűrű specifikus módosítása következében fokozott antagonista aktivitást eredményez. A Phe benzolgyűrűje a para- 55 vagy 4-helyzetben klór-, fluor- vagy brómatommal vagy nitrocsoporttal szubsztituált, melyek közül előnyben részesítjük a klór- és a fluoratomot. A 6-helyzetben 4-NH2-D-Phe vagy D-Aig foglal helyet. Az 5-, 7- és 10- helyzetben a szubsztitúció tetszőleges. Ha az 5- helyzet- 60 ben Cl-Phe szubsztitúciót alkalmazunk, a klóratom az orto- vagy vagy 2-pozícióban helyezkedik el. Minthogy ezek a peptidek igen hatásosan gátolják az LH-felszabadulást, gyakran GnRH-antagonistáknak nevezik őket. E peptidek nőstény emlősöknél gátolják az 65 ovulációt, ha igen alacsony dózisszinten a proösztrusz-
