191858. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil plurilamelláris vesiculumok előállítására
191 858 2 Subcutan fertőzések okozta keratoconjunctivitis kezelése M. bovis, ATCC 10900 törzset 1 x 107 sejt/ml steril fiziológiás sóoldat koncentrációra hígítót- 5 tunk. A bakteriális szuszpenzió 0,1 ml térfogatú alikvotjával felnőtt nyulak szemét fertőztük, melyet a fentiekben leírtak szerint már előzetesen is fertőztünk és SPLV-kezelést alkalmaztunk. Valamennyi nyúl jobb szemét a kötőszövetben 10 0,1 ml M. bovis-sal subcutan fertőztünk, és valamennyi állat bal szemét 0,1 ml M. bovis-sal lokálisan fertőztünk. Valamennyi állat mindkét szemének kötőszövetéből naponta tenyészeteket vettünk, és a M. bovis izolálása céljából azokat 15 vér agar lemezre helyeztük. 3 nappal az inokulálás után a nyulakat három csoportra osztottuk: két állat nem kapott kezelést; három állat standard szemészeti glicerin szuszpenzióban streptomycint kapott (streptomycin koncentrá- 20 ció: 10 mg/kg testsúly); négy állat fiziológiás szuszpenzióval SPLV-be épített streptomycint kapott (10 mg streptomycin-szulfát) kilogramm testsúly). A szuszpenziót vagy az oldatot 0,1 ml térfogatban lokálisan adtuk mindkét szembe. 24 25 óra elteltével és az elkövetkező öt nap mindegyikén tamponozással mindegyik nyúl kötőhártyájáról mintát vettünk. A vér agar lemezen kapott M. bovis izolátumokkal nyert eredményeket a 16. táblázat mutatja. A kísérletek végén 30 valamennyi állatot felboncoltuk és a kötőhártyát eltávolítottuk. A mintákat vascularizáltuk, szétvagdaltuk, homogenizáltuk és a M. bovis izolálására vér agar lemezekre helyeztük. A kapott eredményeket a XVII. táblázat mutatja. 35 SPLV és liposzóma készítmények hatékonyságának összehasonlítása szemfertőzések kezelésében 40 M. bovis (ATCC 10900 törzset streil fiziológiás sóoldatban 1 x 107 sejt/ml koncentrációra hígítottunk. A bakteriális szuszpenzió 0,1 ml térfogatú alikvotjával felnőtt nyulak mindkét sze- 45 mének kötőszöveteit szubkután fertőztük. Mindkét szem kötőhártyájából naponta váladékot vettünk és azt a M. bovis izolálása céljából vér agar lemezre vezettük. Ezt a műveletet valamennyi állatnál elvégeztük. 5 nappal a fertőzés után a nyu- 50 lakat 6 csoportra osztottuk: 2 állat nem kapott kezelést (kontroll); három állat SPLV-be kapszulázott Streptomycin szuszpenziót kapott (10 mg streptomycin-szulfát/kg testsúly), a szuszpenziót 100-szorosára hígítottuk, Ó.D.4g0 = 55 0,928 értéket állítottunk be (480 mm-nél mért optikai sűrűség); három állat SPLV kapszulázott Streptomycin szuszpenziót kapott (10 mg streptomycin-szulfát/kg testsúly) a szuszpenziót 100-szorosára hígítottuk és O.D.480 = 0,449 60 értéket állítottunk be; három állat SPLV-be zárt Streptomycin szuszpenziót kapott (10 mg streptomycin-szulfát/kg testsúly), a szuszpenziót 100-szorosára hígítottuk, O.D.480 = 0,242 értéket állítottunk be; három állat SPLV-be kap- 65 szulázott Streptomycin szuszpenziót kapott (10 mg streptomycin-szulfát/kg testsúly), a szuszpenziót 100-szorosra hígítottuk és O.D.480 = 0,119 értéket állítottunk be; két állat multilamelláris vesiculumba (MLV) zárt streptomycin szuszpenziót kapott (10 mg streptomycin-szulfát/kg testsúly) a szuszpenziót 100-szorosra hígítottuk és O.D.480 =0,940(értéket állítottunk be. Az MLVs-t a Fountain et al. Curr. Micro 6:373 (1981) irodalmi helyen ismertetett eljárással állítottuk elő, oly módon, hogy szárított lipid filmhez streptomycin-szulfátot adtunk, melyet ezután megkevertünk és két napon át duzzasztójuk; a be nem épült streptomycint ismételt centrifugálással eltávolítottuk. XVI. táblázat M. bovis-sal a kötőhártya membránon kialakított fertőzés utáni izolátumok vizsgálati eredményei szemészeti glicerines streptomycin oldattal vagy SPLV-be kapszulázott streptomycint tartalmazó fiziológiás sóoldattal végzett kezelés során Csoport Állat számb M. bovis tenyészetek3 Post infekciós napok Előkezelés Utókezelés 12 3 4 5 Kontroll 1 + + + + + 2 + + + + + Glicerines strepto-1 + + + + + mycin oldat^ 2 + + + + + SPLV-be kapszu-3 + 4 + + + lázott 1 + 4-0 0 0 streptomycine 2 + + 0 0 0 3 + 4-0 0 0 4 + 4 0 0 0 Megjegyzések a XVI. táblázathoz: aA tenyészetek kialakítása M. bovis-telepek vér agar lemezre helyezésével és 24 órán keresztül 37 °C hőmérsékleten végzett inkubálásával történik. (+) azt jelzi, hogy az érték = 1 CFU M. bovis/izolátum hányadosnál; 0 = telepeket nem detektáltunk. bValamennyi állatot mindkét szemen lokálisan 1 x 106 CFU M. bovis-sal fertőztünk; a jobb szem kötőszöveti membránjába 1 x 106 CFU M. bovis-t injektáltunk; a bal szembe lokálisan 1 x 106 CFUM. bovis-t adtunk. cAz állatokat mindkét szemen lokálisan 0,1 ml térfogatú oldattal kezeltük. dAz állatokat mindkét szemen lokálisan szemészeti glicerines streptomycin oldattal kezeltük (10 mg/kg testsúly). eAz állatokat mindkét szemen lokálisan SPLV- be kapszulázott streptomycint tartalmazó steril fiziológiás sóoldattal kezeltük (10 mg/kg testsúly). 20
