191858. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil plurilamelláris vesiculumok előállítására
1 191 858 2 Inokulálás után 7 nappal az állatokat tíz csoportba osztottuk oly módon, hogy mindegyik csoportba öt egér került. 1. csoport - kezelést nem kapott, kontroll; 2. csoport — puffer-telített SPLV-vel kezelt (0,2 ml I.P.) után 7 és 10 5 nappal poszt-inokulálás; 3., 4., 5. és 6. csoport 0,2 ml térfogatban intraperitoneálisan dihidrostreptomycin, gentamycin, kanamycin vagy Streptomycin, vizes injekciót kapott 10 mg/kg testsúly mennyiségben inokulálás után 7 és 10 10 nappal (ezen antibiotikumok mindegyike in vitro körülmények között a B. canis-t elpusztítja). A 7., 8., 9. és 10. csoport — SPLV-be zárt dihidro-streptomycint, gentamycint, kanamycint vagy sztreptomycint kapott 10 mg/kg testsúly meny- 15 nyiségben inokulálás után 7 és 10 nappal B. canis-sal végzett inokulálás után 14 nappal valamennyi állatot megöltük, a lépet aszeptikusán eltávolítottuk, homogenizáltuk, hígítást sorozatot készítettünk, és azt a B. canis izolálására brucel- 20 la agarra vezettük. A kapott eredményeket a X. táblázat mutatja. X. táblázat Különböző antibiotikumok B. canis in vivo gátlásának összehasonlítása3 Telep képző egység B. canis/lép*5 SPLV-be zárt vizes oldat antibiotikum Kezeletlen antibiotikum0 3.93±1.51xl06 4.66±0.87xl06 Dihidro-strepto mycin 1.13±0.30xl05 0 Gentamycin 7.06±2.53xl05 0 Kanamycin 2.72±0.91xl05 0 Streptomycin 1.01 ±0.17x105 0 a) Intraperitoneális kezelés, 10 mg/kg testsúly, a kontroli-csoport nem kapott keze- 40 lést b) A túlélő B. canis az egyes szervekre vonatkoztatva a CFU izolátumok száma/lép hányadosban lett meghatározva. c) Szuszpenziós kultúrában B. canis-t gátló an- 45 tibiotikumok. A B. canis-sal fertőzött egerek különböző antibiotikumokkal történt kezelése során kapott eredményeket a X. táblázat foglalja össze. A ka- 50 pott eredmények azt mutatják, hogy az antibiotikumok, melyek in vitro körülmények között (azaz szuszpenziós kultúrában) B. canis gátlást mutattak, in vivo körülmények között csak akkor mutattak B. canis gátlást, ha azokat SPLV- 55 be kapszuláztuk. A kezelést akár vizes antibiotikumokkal, vagy puffer-telített SPLV-vel végeztük, vagy kezelés egyáltalán nem történt, azt tapasztaltuk, hogy a lépszövetből nem volt izolálható túlélő B. canis. 60 B. canis-sal fertőzött kutyák kezelése Felnőtt nőstény egyeneslábú vadászkopókat orálisan és vaginálisan B. canis ATCC 23365 (lxlO7 * * CFU) tenyészettel fertőztünk. Inokulálás után hét nappal a kutyákat három csoportba osztottuk. Az 1. csoport — kezelést nem kapott, kontroll; a 2. csoport — (7 és 10 napos posztinokulálás) 10 mg/kg testsúly dózisban vizes streptomycin-szulfátot kapott (az adagolás 5,0 ml térfogatban I.P. történt); a 3. csoport - (7 és 10 napos poszt-inokulálás) 10 mg/kg testsúly dózisban SPLV-be zárt streptomycin-szulfátot kapott (az adagolás 3,0 ml térfogatban I.P. történt). Meghatározott időközökben a kutyák vaginális tamponjait és heparinizált vérmintáit összegyűjtöttük. A B. canis izolálása céljából a tamponokat és a vérmintákat brucella agarra helyeztük. A kapott eredményeket a XI. táblázat mutatja. A kísérlet megkezdése előtt, alatt és végén a szériummintákat összegyűjtöttük, a B. canis által kiváltott szérum antitest meghatározására. Ezeket az eredményeket ugyancsak a XI. táblázat mutatja. B. canis-sal végzett inokulálás után huszonegy nappal valamennyi állatot euthanizáltuk. Az alábbi szöveteket aszeptikusán eltávolítottuk, homogenizáltuk és a B. canis izolálására hígítási sorozatot készítettünk, melyet brucella agarra vezettünk: heparinizált vér, vaginális váladék, tüdő, lép, szinoviális nedv, méh, petefészek, térdhajlati nyirokcsomó, nyálmirigy, mandula, gáti nyirokcsomó, bélfodornyirokcsomó, csontvelő, felszíni nyaki nyirokcsomó, kiegészítő nyirokcsomók. A kapott eredményeket a XII. táblázat foglalja össze. XI, táblázat B. canis-sal fertőzött kutyák kultúrás és szerológiai tesztjeinek eredményei kétlépéses antibiotikum kezelésben» B. canis SPLV-be fertőzés zárt utáni napok száma Kontroll Streptomycin*5 Streptomycin0 Élőké-R M B V R M B V R M B V zélés 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 ND ND + + ND ND + 0 ND ND + + 4 ND ND + + ND ND + + ND ND + + Utókezelés 8 0 0 0 + 0 0 + 0 0 0 0 0 10 0 0 0 + 0 0 0 + 0 0 0 0 21 1.5 2 + 1 2 + + 0 0 0 0 a) R (gyors slide agglutinációs teszt) a szérumérték-B. canis antigén reciproka (xlO2 ); 0 = nem detektálható érték. M (2-merkapto-etanol tube agglutinációs teszt) a szérumérték B. canis antigén reciproka (xlO2 ); 0 = nem detektálható érték. B (vérkultúra) és V (vaginális kultúra) brucella agar-on: + = a detektálás 1 CFU-nál nagyobb vagy azzal egyenlő; 0 = telep nem mutatható ki; a kontrollok nem kaptak kezelést. 15
