191743. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antraciklin szerkezeti típusú antibiotikumok előállítására
1 2-5,12-naftacéndion kloroformmal, a 8-/1 -hidroxietil/-1-metoxi-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,1 l-trihidroxi-5,12- -naftacéndion 5% metanol tartalmú kloroformmal oldódik le az oszlopról. A terméket tisztán tartalmazó frakciókat vákuumban bepároljuk, és a kapott bepárlási maradékokat n-hexán-kloroform elegyből átkristályosítjuk. A kapott termékek: 52 mg 8-acetil-1-metoxi-7,8,9,10-tctrahidro-6,8,11- -trihidroxi-5,1 2-naftaccndion Op227-232l’C. Ultraibolya színkép (96$ etanol): X nm 234 252 288 490 521 El*! 716 763 203 310 192 lem Az infravörös színkép megegyezik az. I'. J. Rullock és munkatársai által leírttal [Pharmacol. Exp. Titer. 182,70(1972)]. Tömegspektrum: 382 [M]*, 364 [M-lljO], 339 [M-COCHjJ, 321 [M-C0CH3-H20]’ 311 [M-COCH3--cor. 26 mg 8-acetil-l-metoxi-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,10,-11 -tetrahidroxi-5,12-naftacéndion Op.: 215—216°C. Ultraibolya színkép (96%-os etanol): nm 233 250 28? 492 528 üj* 876 636 201 282 168. Infravörös színkép (KBr): izOH 3460, uT-H, nOH (kelátban) 3100 -2300, nOO (keton) i<’=0 (kelátban levő kínon) 1617 cs 1580, uU-O-C 1 288 cm’1. Tömegspektrum: 398 (M]*, 380 [M-ll.Of, 362 [M-2H20]\ 355 [M-COCH,]’ 337 [M-COCH,-1120]' 309 [M-COCH3 -H20-C0]\ 250 mg 8-/1 -hidroxietil/-1 -metoxi-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trih idroxi-5,12-naftacéndion Op.:229-235<’C. Ultraibolya színkép (96ú-os etanol): Xm„v nm 234 252 287 490 525 III aA Eícm 668 702 191 272 ,93‘ Az infravörös színkép megegyezik az F. J. Bullock és munkatársai által leírttal [Phatmacol. Exp. Ther. 182. 70 (1972)1. Tömegspektrum: 384 [Mf, 366 [M-H20>, «339 [M-CH/OH/CH3]+, 321 [M-CH/OH/-CH3-H20] ,311 [M-CH/OH/CIT, -CO]+ 3. példa A Streptomyces coerulescens (MNG 00200) burgonya-glükóz-ferdeagar tenyészetéről lemosott spóraszuszpenziójával beoltunk 3 literes Erlenmeyer lombikban sterilezett 500 ml Dl-jelű táptalajt. A tenyészetet 48 óráig, 32°C-on síkrázógépen (250 fordulat/perc, 10 cm kitérés) növesztjük. Ezután a tenyészettel saválló acél fermen torban 121°C-on, 60 percig sterilezett 100 liter DT,-jű táptalajt oltunk. Ezt követően 28°C-on 100 liter/perc levegő átáramoltatása mellett fermentáljuk. A fermentlé a tenyésztés 120. órájában 150 pg/ml daunomicint tartalmaz. 100 liter 150 jug/ml daunomicin tartalmú fermentléliez keverés közben hozzáadunk 2,7 kg oxálsavat. Ezután a fermentlevet egy órán át 50°C-on kevertetjük, majd ^C-ra lehűtjük, és pH-ját 5n nátrium-hidroxiddal 4,5-re állítjuk. Az így kezelt fermentlevet 3 órán át kevertetjük 5 liter Amberlite IRC-50 H+ 6 ciklusú gyantával. Ezt követően ülepítéssel elkülönítjük a gyantát a fermen tjéből, és háromszor 10 liter ionmentes vízzel alaposan kimossuk, majd oszlopba (magasság-átmérő arány = 10) töltjük. A gyantaágyat először 25 liter 50% vizet tartalmazó metanollal, majd 25 liter 10% vizet tartalmazó metanollal mossuk, ezt követően 1% nátrium-kloridot tartalmazó metanol-víz (9 : 1) eleggyel eluáljuk. Az antibiotikum komplexet tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd a metanolt vákuumban ledesztilláljuk. A kapott vizes sűrítményt 2n nátrium-hidroxiddal pH = 8,5-re lúgosítjuk, és háromszor 2,5 liter kloroformmal exttaháljuk. A kloroformos extraktumot vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, majd az antibiotikum bázis tartalmának megfelelő mennyiségű 5%-os sósavas kloroformot adagolunk hozzá. Ezután az oldatot csökkentett nyomáson 500 ml re bepároljuk, majd a sűrítményhez 2,5 liter petrolétert adagolva kicsapjuk a hidroklorid-sót. így 24 g 50% daunomicin-hidroklorid tartalmú nyerstermékhez jutunk. A nyersterméket az 1. példában leírt módon tisztítva 11,9 g tiszta daunomicin-hidrokloridot és 1,2 g tiszta daunorubicinol-hidrokluridot kapunk. 4. példa A Streptomyces coerulescens (MNG 00200) 1. példában leírt módon készített 100 ml Dl jelű inokulum tenyészetével beoltunk 10 literes laboratóriumi üvegfcrinentorban 60 percig 121°C-on sterilezett 5 liter Dl táptalajt. A tenyésztést 30°C-on, 500-as fordulatszámú keverés és 5 liter/perces levegőztetés mellett vétezzük 24 óráig, szükség esetén steril 3A jelű hab/ásgátló készítményt (Chinoin) adagolva a tenyészethez. E kultúra 0,5 literével oltunk 10 literes laboratóriumi üvegfermentorban 90 percig, 121°C-on sterilezett 5 liter DT-, jelű táptalajt, melynek összetétele a következő: 0,2 s.%- kukoricakeményítő 2 s.% szójaliszt 0,1 s.% kazeinhidrolizátum (kazeinre számítva) 8,8 s.% glicerin 0,5 s.% kalcium-karbonát 0,3 s.% nátrium-klorid 0. 01 s.% kobalt/TI/-klorid-víz /1/6/ csapvízben. A pH = 7,0 sterilezés előtt. A tenyésztés 30°C-on, 1000-es fordulatszámú keverés és 5 litm/perces levegőztetéssel történik, amelynek folyamán szükség szerint 3A jelű habzásgátlót adagolunk. A tenyészet a fermentáció 148. órájában 415 pg/ml daunomicint tartalmaz. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás a daunomicin és daunorubicinol antibiotikumok és gyógyászatiig elfogadható sóik, továbbá antraciklinvázas antibiotikum-származékok szintézisében kiindulási anyagként használható 8-acet il-1-metoxi-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,10,11-tetrahidroxi-5,1 2-naftacéndion, 8-acetil-1 -metoxi-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,ll-trihidroxi-5,12-naftacéndion és 8-/1 - -hidroxietil/-1 -metoxi-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11 -trihidroxi-5,12-naftacéndion előállítására asszimálható szén- és nitrogénforrást és ásványi sókat tartalmazó táptalajon végzett aerob fermentációval, továbbá a képződött termékek kívánt esetben történő elkülöníti 743 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
