191603. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikai reagens és eljárás hidrofil latexrészecskéket tartalmazó szuszpenziók előállítására
191 603 14 nak oldatából 1 ml-t adunk és az elegyet rövid időn át rázzuk. A latexrészecskék most legalább 2 órán át egyenletes szuszpenziót képeznek. A szuszpenziót mérőküvettába visszük és 405 nm-en merjük az extinkciót. A mért értékekből az üres szubsztrátun. g extinkciós értékét (Li) levonjuk. Az üres szubsztrátum ugyanannyi megrakott latexrészecskét tartalmaz, mint az anti-TSH-antiszérum és a TSH-glükózoxidáz elegyéhez adagolt latexszuszpenzió. Az üres szubsztrátumoldat 1 ml-jénck az extinkciója = L|. 1 j A mért extinkciókat a TSH különböző etalonkoncentrációinak függvényében grafikusan ábrázoljuk. Az így nyert kalibrációs görbén az ismeretlen TSH-tartalmú klinikai minták TSH-tartalmát a mért extinkció alapján leolvashatjuk. 13 Pufferoldatként előnyösen 0,005 M EDTA-t, 0,1 t% marhaszérum-albumint és 0,15 M konyhasót tartalmazó, 7,4 pH-jú, 0,04 M koncentrációjú foszfátoldatot alkalmazunk. O j'A A glükózoxidáz szubsztrátumának oldataként előnyösen olyan oldatot alkalmazunk, amely 100 miben 5 g glükózt, 100 mg 2,2’-azino-di-(3-etil-benztiazolon-6-szulfonsav)-at (ABTS), 5 mg peroxidázt tartalmaz 0,05 M 5,6 pH-jú foszfátpufferben. összehasonlítás céljából három szérumminta TSH- 25 tartalmát a fenti EIA-teszttel, majd az ismert kettős antitest RIA teszttel is meghatároztuk. Az alábbi táblázatból kitűnik, hogy az eredmények jól egyeznek. 13 . ElA-teszt Kettős antitest RIA 1. szérum-minta 11,2 pU/mi 12,5 pU/ml 2. szérum-minta 7,3 jtiU/ml 7,1 pU/ml 3. szérum-minta 3,8 pU/ml 4,5 pU/ml A TSH-meghatározás is azt mutatja, hogy a találmány szerint előállított hidrofil latexrészecskék biológiailag és/vagy immunológiailag aktív anyagok, különösen antitestek hordozójaként kiválóan alkalmazhatók. A nemfajlagos kötés mennyiségéjiek meghatározása A TSH egy etalon-mintáját a fentiekben (,,A kísérlet végrehajtása” cím alatt) leírt módon kezeljük. Hasonló mintát is készítünk, amelyből azonban az anti-TSH-antiszérumot kihagyjuk. A különben azonos módon kezelt két minta extinkciós értékét összehasonlítjuk: Teljes minta Anti-TSH-antiszérum nélkül Szuszpenzióban mért extinkció az Li levonása után 1,028 0,015 Az értékek azt mutatják, hogy a nemfajlagos kötés 1,5 %-nál kisebb. Szabadalmi igénypontok 1. Eljáiás hidrofil latexrészccskéket tartalmazó szuszpenzió előállítására egy vagy több, vízben nehezen oldódó glicidil-metakrilát- és/vagy glicidil-akrilát bázisú monomerből, vizes diszperzióból, szabad gyököket szolgáltató iniciátor jelenlétében, védőgáz atmoszféra alatt, azzal jellemezve, hogy a monomert emulgeátortól, stabilizátortól és nedvesítőszertől mentes közegben emulziós polimerizálással homovagy kopolimerizáljuk és kívánt esetben a terminális epoxi csoportokat tartalmazó latexet az emulziós polimerizálás alatt vagy után vizes alkálifém-hidroxidoldattal, vizes ammóniaoldattal, primer, aminnal vagy hidrozinnal hidrolizáljuk, ammonolizáljuk vagy aminotizáljuk és kívánt esetben a képződött hidroxil-, illetve monoszubsztituált aminocsoportokat perjodáttal, illetve perjódsavval aldehidcsoporttá alakítjuk. 2. Diagnosztikai reagens, azzal jellemezve, hogy hordozóként az 1. igénypont szerint előállított hidrofil latexrészecskékeí és a hordozóhoz közvetlenül vagy Ilidként szolgáló kapcsoló vegyületen keresztül kovalensen kötött biológiailag aktív, előnyösen immunológiailag aktív proteint tartalmaz. 3. A 2. igénypont szerinti diagnosztikai reagens, azzal jellemezve, hogy immunológiailag aktív proteinként tiroxin-antitestet tartalmaz. A 4. 2. igénypont szerinti diagnosztikai reagens, azzal jellemezve, hogy immunológiailag aktív proteinként emberi tireotropin-antitestet tartalmaz. Ábra nélkül Kiadja az Országos Találmányi Hivatal A kiadásén IV lel : I limer Zoltán osztályvezető Megjelent:a Műszaki Könyvkiadógoiulozásábim COPYLUX Nyomdaipari és Sokszorosító Kisszövetkezet
