191386. lajstromszámú szabadalom • Eljárás streptomyces törzsek antibiotikum termelőképességének fenntartására és fokozására
1 191 386 2 egyesítjük, majd csökkentett nyomáson a metanolt ledesztilláljuk. A kapott vizes sűrítményt 2n nátriumhidroxiddal pH = 8,5-re lúgosítjuk, majd háromszor 200 mi kloroformmal extraháljuk. Az egyesített kloroformos extraktumot vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, vákuumban maximálisan 30 °C-os vízfürdőről 40 ml-re besűrítjük. Az antibiotikumot 300 ml n-hexán hozzáadásával kicsapjuk. A csapadékos oldatot egy éjszakán át 5 °C-on tároljuk, majd a kiülepedett csapadékról dekán táljuk az oldatot, a maradékot pedig szűrjük, nhexánnal mossuk és foszfor-pentoxid felett vákuumban szárítjuk. így 2,08 g nyers dauriomicin bázishoz jutunk. 2,08 g nyers bázist 20 ml n-butanol-víz-tömény sósav (94:5:1) elegyében 0 °C-on szuszpendáljuk. Ezután a szuszpenzióhoz hozzáadunk 200 ml n-hexán-aceton (60:40) elegyet és a csapadékos oldatot egy napig hűtőben tároljuk. Szűrés után a terméket kevés n-hexánaceton (60:40) eleggyel mossuk, majd foszforpentoxid felett vákuumban szárítjuk. így 1,75 g nyers daunomicin-hidrokloridhoz jutunk. A nyers terméket szilikagél oszlopon végzett adszorbciós kromatográfiával tisztítjuk tovább. Az 1,75 g nyers terméket feloldjuk 15 ml vízmentes metanolban és rápároljuk 3,5 g szilikagélre (Kieselgéi 60 Reanal). Ez utóbbit felvisszük 50 g szilikagélből kloroformmal készím tett — = 6 oszlopra. Az oszlopot kloroform-metanol <t> elegyekkel eluáljuk oly módon, hogy a metanol koncentrációját 3 %-os fokozatokban 24 %-ig növeljük. A daunomicin-hidrokloridot tartalmazó frakciókat egyesítjük és csökkentett nyomáson 10 ml-re bepároljuk. A sűrítményhez 30 ml kloroformot adunk, majd 300 ml nhexánnal kicsapjuk a hatóanyagot, Szűrés után az anyagot foszforpentoxid felett vákuumban szárítjuk. így 0,94 g daunomicin-hidrokloridot nyerünk, amely egy kevés daunomicin-bázist tartalmaz. Hozam: 75 %. Ez utóbbit sósavat tartalmazó dioxánvíz elegyből kristályosítjuk át. A 0,94 g terméket felold- 5 juk 9,4 ml dioxán-víz (80:20) elegyben, melyhez előzőleg a szabad daunomicin-bázis tartalommal ekvivalens tömény sósav oldatot adagoltunk, s az oldathoz adunk 75 ml vízmentes dioxánt, majd egy napig 15-20 °C-on kristályosítunk. Utána a kristályokat szűrjük, mossuk 10 kevés n-hexán-aceton (60:40) eleggyel és foszforpeníoxid felett vákuumban szárítjuk. Így 0,73 g kristályos iaunomicin-hidrokloridot nyerünk. Op.: 188-189 °C. 15 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás daunomicint termelő Streptomyces coeru- 20 lescens törzsek termelőképességének fenntartására és fokozására, azzal jellemezve, hogy a termelő törzs spóráit streptomicin-szulfát tartalmú tápagarra szélesztetjük, majd a kinőtt telepeket streptomicin-szulfát tartalmú táptalajra izoláljuk. 25 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a kiindulási termelő törzs spóráit 0,25 — 1,00 £tg/ml streptomicin-szulfát tartalmú tápagarra szélésztjük. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás fogana- 00 íosítási módja, azzal jellemezve, hogy az átoltási művele- 1 tét addig végezzük, fokozatosan növekvő streptomicinszulfátot tartalmazó tápagaron, amíg 100—400-szorosra emelkedett streptomicin-rezisztenciájú törzseket nem kapunk. Ábra nélkül Kiadja az Országos Találmányi Hivatal A kiadásért telel: Hinter Zoltán osztályvezető Megjelent a Műszaki Könyvkiadó gondozásában COPYLUX Nyomdaipari és Sokszorosító Kisszövetkezet
