191371. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új muramil-peptid-származékok és ezeket a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 191 371 2 A kiindulási anyagot a következőképpen állítjuk elő: A 14. példában leírt módszerhez hasonlóan (hidrogénezési idő 20 perc) állítjuk elő 7,3 g (11,3 mmól) N-propionil - dezmetilmuramil • L - alanil - D - glutaminsav(Ca)-n-butilészter-(C7)-benzilészterből az N-propionildezmetilmuramil-L-alanil-D-glutaminsav-ú-n-butilésztert. A termék színtelen por és 0,88 mól kristályvizet tartalmaz. [a]5° = +16,4°±0,1° (c = 0.959, vízben), Rf=0 ,61 (metilénklorid-metanol-víz, 70:30:5 rendszerben) és Rf = 0,52 (acetonitril-víz, 3:1 rendszerben). A kiindulási anyagot a következőképpen állítjuk elő: A 13. példában leírt módszerhez hasonlóan állítjuk elő 9,5 g (13,97 mmól) 4,6-0-izopropilidén-N-propionildezmetil:nuramil-L-alanil-D-glutaminsav-(Ca)-n-butilcszter-(CT)-benzilészterből és 120 ml 60 %-os ecetsavból az N-propionil-dezmetil-muramil-L-alanil-D-glutaminsav(Ca>n-butilészter-(C7>benzilésztert„ mely 0,41 mól kristályvizet tartalmaz. [a]16 * * * 20 =+15,7°±Q,1° (c= 1,019, metanolban), Rf = 0,23 (metilénklorid-metanol, 9:1 rendszerben), Rf = 0,45 (metilénklorid-metanol, 5:1 rendszerben) és Rf = 0,82 (metilénklorid-metanol-víz, 70:30:5 rendszerben). A kiindulási anyagot a következőképpen állítjuk elő: A 13. példában leírt módszerhez hasonlóan állítjuk elő 3,81 g (10,76 mmól, még 2,72 mmól/g nátriumkloridot tartalmazó) 4,6-0-izopropilidén-N-propionil-dezmetilmuramilsav-nátriumsóból, 2,44 g (11,83 mmól) diciklo-hexil-karbodiimidből, 1,36 g (11,83 mmól) N-hidroxiszukcinimidből és 4,3 g (10,76 mmól) L-alanil-D-glutaminsav-(Ca)-n-butilészter-(C7)- benzilészter - hidroklorid - ból a 4.6-0-izopropilidcu-N-propionil-dezmetilmuramil- L-alanil-D-glutaminsav-(Ca)-n-butilészter-(C7) - bcnzilcsztert. [a]p° = 10,6°±0,1° (c = 0.928, metanolban), Rf = 0,81 (metilénkiorid-metanol-vízm 70:30:5 rendszer rendszerben) és Rf = 0,57 (metilénklorid-metanol,5:1 rendszerben). 16. példa 2,85 g (2,09 mmól) a 14. példában leírtakhoz hasonlóan előállított N-propionil-dezmetilmuramil-L-alanil-D- glutamil - (Ca) - tere - butilészter - (C7) - L - alanin - 2- (1,2 - dipalmitoil - sn - glicero - 3 - hidroxi - foszforiloxi)-etilamid-nátriumsó 112 ml vízmentes metilénkloriddal készített oldatához 28 ml trifluor-ecetsavat adunk cs az egészet 3 órán át keverjük szobahőmérsékleten. A színtelen, tiszta oldatot vákuumban 30 °C-on bepároljuk és a maradékot többször keverjük el metilénkloriddal és ismételten bepároljuk. Így 3,0 g színtelen olajos anyagot nyerünk, melyet 350 ml foszfátpuffer-nátriumklorid oldat (egyaránt 0,1 mólosak, 1:1, pH = 7) elegyében oldunk és AMICON-dializáló cellában (402 modell, ultraszűrő PM 37/76 mm $) 3 bar túlnyomáson szűrjük. Végül még összesen 2,1 liter kétszer desztillált vízzel szemben dializálva szűrjük kloridmentesre. A cellában visszamaradt oldatot (körülbelül 50 ml) nagyvákuumban liofilizáljuk. Az így nyert Iiofilizátumot 260 g szilikagéllel („60 reinst” Merck, 0,063-0,200 mm) töltött oszlopon kromatografálva tisztítjuk. Eluálószerként 70:30:5 arányú kloroform-metanol-víz elegyet alkalmazunk, 10 mles frakciókat fogunk fel. A 90-260 frakciókat egyesítjük és nagyvákuumban melegítés nélkül (hűtés közben) szárazra pároljuk. A maradékot 250 ml kétszer desztillált vízben oldjuk és AMICON-dializálócellában (402 modell, ultraszűrő PM 80/76 mm <p) 3 bar túlnyomáson először 50 ml-re szűkítjük be, majd egymást követően 250 ml foszfátpuffer-nátriumkloridoldattal (egyaránt 0,1 mólosak, 1:1, pH = 7) és 1750 ml kétszer desztillált vízzel szemben kloridmentesres szűrjük. A cellában visszamaradó oldatot végül két Millipore-szűrőn (NALGENE S, 0,45 p, illetve 0,2 p) sterilre szűrjük és nagyvákuumban liofilizáljuk. így 1,04 g (az elméleti hozam 36,4 %-a) N-propionildezmetilmuramil-L-alanil-D-glutaminsav-(C7)-L-alanin-2- (1,2 - dipalmitoil - sn - glicero - 3 - hidroxi - foszforil - oxiyctilamid-nátriumsót nyerünk, színtelen, higroszkópos por alakjában, mely 4,80 mól kristályvizet tartalmaz. [a]l5° = -6,1°±0,1° c(c = 0,489, metilénkloridetanol, 1:1 rendszerben), Rf = 0.28 (etilacetát-n-butanol-piridin-ecetsav-víz, 42:21:21:6:10 rendszerben) és Rf = 0,62 (acetonitril-víz, 3:1 rendszerben). 17. példa 4,5 g (34 mmól) 12. példában leírt módszer szerint előállított N-acetil-muramil-L-alanil-D-glutamil-(Ca)-tercbutilcszter - (C7) - L - alanin - 2 - (1,2 - dipalmitoil - snglicero-3-hidroxi-foszforil-oxi)-etilamid-nátriumsót, melyet foszforpentoxid felett nagyvákuumban szárítottunk, oldunk 75 ml vízmentes diklórmetánban. Az oldatot 0 °C-ra hütjük le és keverés közben, a nedvesség kizárása mellett 25 ml vízmentes triklórecetsavat öntünk hozzá, majd hagyjuk szobahőmérsékletűre melegedni. Két és fél óra múlva a tiszta, sinteien oldatot forgóbepárolóban, szobahőmérsékleten körülbelül 10 ml térfogatúra pároljuk be, többször adunk hozzá 100-100 ml diklórmetánt és ismételten bepároljuk. A visszamaradó olajos anyagot 100 ml terc-butanolban oldjuk és liofilizáljuk. A nyersterméket kétszer kromatografáljuk 400-400 g 60 jelű szilikagéien. Eluálószerként kloroform-metanol-víz, 70:30:5 arányú elegyet alkalmazunk. A 92-172 frakcióban levő anyagot 100 ml kétszer desztillált vízben oldjuk és dializáló szűréssel (AMICON-dializálócella, 402 modell, ultraszűrő PM 30/76 mm </>) az 1. példában leírtak szerint tisztítjuk. A cellában visszamaradt oldatot Millipore-szűrőn (0,2 ju) szűrjük és liofilizáljuk. így 1,1 g (az elméleti hozam 25 %-a) N-acetil-muramii • L - alanil - D - glutaminsav - (C7) • L - alanin • 2- (1,2 - dipalmitoil - sn - glicero - 3 - hidroxi - foszforil - oxi)-etilamid-dinátriumsót nyerünk, mely 4,89 mól kristályvizet tartalmaz. A termék színtelen, laza por. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 17
