191292. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ribavirin előállítására
3 191 292 4 l,2,4-triazol-3-karboxamidot vagy sóját, és a ribóz donort a mikroorganizmus nem szaporodó körülményei között reagáltatjuk, miáltal az enzimatikps reak ciót optimumon tartjuk. A jelen találmánynak a régebbi fermentativ módszerekkel szembeni előnye az, hogy (1) a magasabb hőmérsékleten végzett reakció - amely jellegzetesen a mikroorganizmus nem szaporodó körülményei között vezetett reakció — minimumra csökkenti a reakcióelegy nemkívánatos mikroorganizmusokkal való szennyeződését; csökkenti a már képződött ribavirin bomlását a nagy ribavirin kitermelés biztosítása mellett; (2) a reakció cnzimatikus, így a szükséges reakcióidő rövidebb, és a melléktermékek képződése kevesebb, mely viszont a szükségéi tisztítást egyszerűbbé teszi ; (3) az enzimforrás ismételt vagy folyamatos felhasználása lehetséges; és (4) az enzimforrást tárolni lehet, és az enzimfoi rás termelése és felhasználása így bármikor elvégezhető. Továbbá, a jelen találmány a régebbi cnzimatikus módszerekkel szemben azzal az előnnyel rendelkezik, hogy (!) az enzimforrást egyszerű elkészíteni; és (2) a ribóz donor könnyen hozzáférhető, mivel ez különböző anyagok széles köréből választható, mint amilyenek a nukleozidok és a nukleotidok. A jelen találmány, amennyiben erre alkalmas enzimforrást használunk, a korábbi módszerekkel ellentétben, a ribavirint messzemenően nagyobb kitermeléssel állíthatja elő. A találmány szerinti enzimatikus reakcióban alkalmazott enzimforrás, mint ahogy az előzőekben leírtuk, egy mikroorganizmuson, egy mikroorganizmustenyészeten, mikroorganizmus intakt sejtjeinek, vagy egy mikróorganizmus módosított sejtjeinek tenyésze tén alapul. A jelen találmányban alkalmazott mikroorganizmusok azok, melyek tenyészete, intakt sejtjei vagy módosított sejtjei olyan enzimet tartalmaznak, mely a ribavirin képződéséhez az l,2,4-triazol-3-karboxamid és ribóz donor közötti reakciót katalizálni képes, ilyenek a Brevibacterium, a Corynebactferium, az Arthrobacter, a Micrococcus, a Bacillus, a Flavobacterium, a Microbacterium vagy Brochothris, a Xanthomonas, a Pseudomonas vagy Alteromonas, az Achromobacter, az Escherichia, az Aerobacter, a Sarcina, a Staphylococcus, a Bacterium, a Serratia, a Proteus, a Cellulomonas, az Enterobacter, a Mycoplana, a Vibrio, az Erwinia, a Klebsiella, az Aeromonas, a Mycotorula vagy a Candida nemzetséghez tartozó mikroorganizmusok, melyek az előbb említett aktivitással rendelkeznek. A jelen találmányban, a mikroorganizmus-törzsek nem különösen korlátozódnak fajokra, amennyiben azok ilyen alaptulajdonságokkal rendelkeznek. A következőkben megadjuk a mikroorganizmustörzsek azon példáit, melyek a szakember számára könnyen hozzáférhetők. (1-1) Brevibacterium acetylicum AT-6-7 FERM P-6305 (ATCC 39 311) (1 -2) Brevibacterium imperiale ATCC 8365 (2-1) Corynebacterium equi IÁM 1038 (3-1) Arthrobacter citreus 1FO 12 057 (ATCC 11 624) (3-2) Arthrobacter globiformis IFO 12 137 (ATCC 8010) (4—1) Micrococcus luteus ATCC 4698 (!AM 1056) (4 — 2) Micrococcus variáns IFO 3765 (ATCC 399) (4-3) Micrococcus roscus IFO 3768 (ATCC 186) (5-1) Bacillus subtilis STCC 14 593 (5-2) Bacillus cercus IÁM 1029 (6—1) Flavobacterium arborescens IFO 3750 (ATCC 4358) (6-2) Flavobacterium lutescens IFO 3084 (1AM 1667) (ATCC 25 311) (6—3) Flavobacterium lutescens IFO 3085 (7—1) Microbacterium thermosphactum IFO 12 167 (Brochotrix thermosphacta ATCC 11 509) (8-1) Xanthomonas oryzae IFO 3312 (Xanthomonas campestris ATCC 21 754) (9—1) Pseudomonas putrefaciens IFO 3908 (Alteromonas putrefaciens ATCC 8071) (9 — 2) Pseudomonas putrefaciens IFO 3909 (Alteromonas putrefaciens ATCC 8072) (9—3) Pseudomonas putrefaciens IFO 3910 (Alteromonas putrefaciens ATCC 8073) (9 — 4) Pseudomonas schuylkillicnsis IÁM 1051 (9-5) Pseudomonas ovális 1 AM 1002 (9 — 6) Pseudomonas dacunchae IÁM 1089 (10— I) Achromobacter parvulus IFO 13 182 (NRRL B-2395) (10-2) Achromobacter xerosis IFO 12 668 (11 — 1) Escherichia coli IFO 3301 (11—2) Escherichia coli 1AM 1268 (ATCC 11 303) (12- 1) Aerobacter aerogenes IÁM 1019 Ezt a mikroorganizmus-törzset a Fermentation Reearch Institute-nál, Agency of Industrial Science & echnology (a következőkben FERM-ként jelölve), fatabe-machi, Ibaragi, Japán, 1983. május '24-én ”ERM P-6358 letéti szám alatt helyeztük letétbe, (13-1) Sarvina marginata IÁM 1130 Ezt a mikroorganizmus-törzset FERM-nél 1982. május 24-én FERM P-6539 letéti szám alatt helyeztük letétbe. (14- I) Staphylococcus aureus IÁM 1011 (ATCC 6538 P) (13-2) Staphylococcus aureus IFO 3060 (15-1) Bacterium succinicum IÁM 1017 Ezt a mikroorganizmus-törzset a FERM-nél 1982. május 24-én FERM P—6540 letéti szám alatt helyeztük letétbe. (16—1) Serratia marcescens IÁM 1105 (17-1) Proteus vulgaris IÁM 1025 (18—1) Cellulomonas flavigena IFO 3753 (18-2) Cellulomonas flavigena IFO 12 680 (ATCC 486) (19-1) Enterobacter aerogenes IFO 12010 ( 19 — 2) Enterobacter cloacae ATCC 7256 (10-1) Mycoplana bullata IFO 13 290 (ATCC 4278) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 .3
