191292. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ribavirin előállítására
21 191 292 22 melésére az eredményeket a 10. táblázat mutatja. A fizikai állandók megegyeznek az 1. példánál megadottakkal. 10. táblázat Ribóz donor Ribavirin kitermelése (%) inozin 49,16 5'inozinsav 39,06 adenozin 34.65 5'-adenilsav 30,80 gunnozin 54,70 5'-guanilsav 46,94 citidin 62,77 5'-citidilsav 62,00 uridin 72.20 5'uridilsav 73,42 ribóz 44,05 11. példa A reakciót a 10. példa eljárása szerint folytatjuk le azzal a különbséggel, hogy Staphylococcus aureus IÁM 1011 és Flavobacterium arborescens 1FO 3750 törzseket, és nukleotidokként all. táblázatban megadott ribóz donorokat használunk. Az eredményeket all. táblázat mutatja. A fizikai állandók azonosak az !. példánál megadottakkal. 11. táblázat i Ribavirin kitermelés (%) Ribóz donor Sta. aureus F. arborescens IÁM ion IFO 3750 5'-inozinsav 23,50 15,99 5'-adenilsav 14,85 13,85 5'-guanilsav 22,50 10,69 5'-citidilsav 10,60 ■ 14,79 5'-uridiIsav 18,29 18,74 12. példa Flavobacterium lutescens 1FO 3084 törzset 2 liter porított húsleves 2 %-os vizes oldatába oltjuk, és a tenyésztést rázással 22 óra alatt 28 °C hőmérsékleten lefolytatjuk. A tenyésztés befejezése után a sejteket elkülönítjük, és mossuk, majd sterilizált vizet adunk hozzá, hogy 200 ml sejtszuszpenziót kapjunk. Ehhez a sejtszuszpenzióhoz 800 ml vizes oldatot adunk, mely 50 mmól l,2,4-triazol-3-karboxamidot, 75 mmól inozint és 50 mmól monokálium-dihjdrogénfoszfálot tartalmaz, és a reakciót 24 óra alatt 60 °C hőmérsékleten lefolytatjuk. A ribavirin kitermelése 72,55 %. A reakció befejezése után a sejteket centrifugálással eltávolítjuk, a felső folyadekfázist csökkentett nyomáson 250 ml térfogatra bctöincnyítjük és lehűtjük. A képződött lu'poxantin és mozin eltávolítása után a maradék elegyet kationcserélő gyantán (H+ forma) átengedjük, majd az áteresztett oldatot és a mosóvizet aktív szénen átfolyaljuk. Az aktív szénről a ribavirint etanol-ammónia oldattal eiuáljuk. Az eluátumbó! az etanol eltávolítása után, a maradékot anioncserélő gyantával töltött oszlopon átengedjük, majd az átfolyt oldatot és a mosóvizet egyesítjük, csökkentett nyomáson 25 ml térfogatra bctöményíljük és lehűtjük. A hűtésre kivált kristályos anyagot elválasztjuk, szárítjuk, így 6,6, g kristályos ribavirint kapunk, amelynek fizikai állandói azonosak az 1. példánál megadottakkal. 13. példa A 12. táblázatban megadott különböző mikroorganizmus-törzsek mindegyikét 100-100 ml porított húsleves 2 %-os vizes oldatába oltjuk, és rázással 22 óra hosszat 30 °C hőmérsékleten tenyésztjük, majd a sejteket elkülönítjük, és a megfelelő sejtekhez annyi vizel adunk, hogy mindegyikből 10 ml-es sejtszuszpenziókat kapjunk. Az előbbi sejtszuszpenziók mindegyikéhez 10-10 ml vizes oldatot (pH = 7,0) adunk, mely 20 mmól 1,2,4 triazol-3-karboxamidot, 30 mmól nátrium-uridilátot és 25 mmól monokálimn-dihidrogén-foszfálot tartalmaz, es a reakciót 23 óra alatt 45 °C hőmérsékleten lefolytatjuk. A reakció befejezése után a sejteket centrifugálássai eltávolítjuk, és a ribavirin kitermelését analízissel meghatározzuk. Az eredményeket a 12. táblázat mutatja. A fizikai állandók értéke azonos az 1. példánál megadottakkal. 12. táblázat Mikroorganizmustörzsek. Ribavirin kitermelés (%) Flavobacterium arborescence IFO 3750 26,98 Alteromonas putrefadens ATCC 8072 44,40 Alteromonas putrefadens ATCC 8073 18.62 Escherichia coli IAM 1268 10,63 Staphylococcus aureus 1AM 10Î1 20,33 Staphylococcus aureus IFO 3060 27,75 Cellulomonas fiavigena IFO 12 680 67,65 5 10 15 20 215 30 3E 4C 45 50 55 60 65 12
