191116. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikrobiológiailag szennyezett felületek klór-dioxid gázzal való sterilizálására
5 191 116 6 bűző, egy szélesebb konccnlrációlartomány ba cső értékeket vizsgáltunk. Exponálás után a papírcsíkokat steril, növekedést elősegítő táptalajt tartalmazó kémcsövekbe helyezzük és megfelelő időközönként megfigyeljük a növekedést. Az alumíniumfóliából készített csészéket vízben üveggyöngyökkel rázzuk, hogy leszedjük a spórákat. Ezután a spóraszuszpenziót alkalmas táptalajokkal hozzuk érintkezésbe és megfigyeljük a növekedést. Ha az inkubáló periódus után nem figyelhető meg növekedés, a besugárzott anyagok sterilek. Azt tapasztaltuk, hogy ha a papírcsíkokat körülbelül I órán át, körülbelül 27 °C hőmérsékleten és 60 % körüli relatív páratartalom mellett körülbelül 40 mg/liter klór-dioxid gáz koncentráció hatásának tesszük ki, a csíkok reprodukálhatóan sterilek lesznek, azaz 9 napos inkubációs periódus után nem figyelhető meg spóranövekedés. Az etilén-oxiddnl szembeni viselkedéssel ellentétben meglepődve tapasztaltuk, hogy a spórák alumíniumon már nem bizonyultak rezisztensnek. A fóliacsészéket körülbelül 35 mg/liter klór-dioxid gáz koncentráció már reprodukálhatóan sterilezi. Minden egyes anyag esetében számos kísérletben sterilitást értünk el alacsony klór-dioxid koncentrációk alkalmazásakor, beleértve a 11 mg/literes, alacsony koncentrációt is. A találmányt az alábbi példákkal szemléltetjük. 1. példa 1000 ml-es, 2 nyakú göinblombikra csepegtető tölcsért és mágneses keverőt szerelünk. Üveggyapot szűrővel és olyan tűszeleppel ellátott gázbevezető csövet szerelünk a lombikra, amely lehetővé teszi azt, hogy a nitrogéngázt a reakcióelegy felülete alá vezessük. A kivezető csövet is tűszeleppel látjuk el, és úgy szereljük fel, hogy a gáz a reakcióedény tetejéről az exponáló kamrába juthasson. Exponáló kamraként egy 2000 ml-es, üvegből készült olyan reakciókazánt használunk, amelyen egy sapkás válaszfallal ellátott nyílás, egy manometer, egy bevezető- és egy kivezetőnyíiás van. Az 1000 ml-es lombik kivezelőcsövéf összekötjük az inkubációs kamra bevezető nyílásával. Általános esetben úgy járunk el, hogy az 1000 ml-es lombikba nitrogénatmoszférában 100 ml 8%-os vizes nátrium-klorit-oldatot mérünk be. Az összes szelepet lezárjuk, és keverés közben cseppenként beadagoljuk 2,0 g kálium-perszulfát 100 ml vízzel készített"oldatát. A reakcióelegyet 30—45 percen át keverjük 27 °C-on a klór-dioxid gáz fejlődésének teljessé tétele céljából. Az exponáló kamrába 3-6, spórával bevont papírcsíkot vagy alumíniumfólia csészét helyezünk, mindegyiket külön-külön, üveg Petri-csészében. A kamrát nitrogéngázzal álöblítjiik, lezárjuk, majd evakuáljuk (102 kPa). Kinyitjuk a reakcióedény kivezető csövének a szelepét, és a reakcióedényből kivezetett klór-dioxid gáz mennyiségét úgy ellenőrizzük, hogy a manométeren leolvassuk a nyomásnövekedést. A kivezető szelepet lezárjuk és az exponáló kamrában uralkodó nyomást nitrogén bevezetésével 100 kPa értékre egészítjük ki. Az exponáló kamra légteréből a válaszfalon keresztül azonnal 0,5—2,0 ml-es mintát veszünk gázt át nem eresztő fecskendő segítségével. A klór-dioxid koncentrációt Wheeler és munkatársainak a módszerével (Microchem. J., 23., 160 /1978/) határozzuk meg. 60 perc múlva újra mintát veszünk a légtérből. Ezután az exponáló kamrát evakuáljuk és szűrt levegővel újra megtöltjük. Az evakuálást és újratöltést megismételjük, a kamrát kinyitjuk és tartalmát steril körülmények között eltávolítjuk. A papírcsíkokat aszeptikus körülmények között tiptikáz-szója táptalajt tartalmazó kémcsövekbe viszszük át és 37 C-on inkubáljuk. A spóranövekedés meglétét vagy hiányát 24 és 48 óra múlva végzett megfigyelésekkel határozzuk meg. Azokat a kémcsöveket, amelyek 48 óra múlva nem mulatnak növekedést, egy héten át inkubáljuk és minden 24 órában megfigyelést végzünk. Ha egy hét után nem figyelünk meg növekedést, a csíkot negatívként vagy sterilizáltként jegyezzük fel. A fóliákat 20-20 ml steril vizet és néhány üveggyöngyöt tartalmazó kémcsövekbe visszük át. A csövek tartalmát élénken rázzuk a spórák leszedése és szuszpeudálása céljából, a szuszpenzió 0,1 ml-ét két párhuzamos kísérletben tiptikáz-szója-agar lemezre visszük fel. A lemezeket 37 C hőmérsékleten inkubáljuk és a fentiekhez a papírcsíkok esetére ismertetett módon megfigyeljük. A kísérletekben megfelelő kontroll csíkokat és fóliákat is vizsgálunk. 18 kísérlet eredményeit foglaltuk össze az alábbi 1. táblázatban 2—19. példaként. /. táblázat Klôr-dioxidos sterilizálás Példa sorszáma Klór-dioxid (mg/ml) csíkok Eredmények* fóliacsészék 2. 11 0/6 0/6 3. 12 0/6 0/6 4. 25 0/6 0/6 5. 31 1/6 0/6 6. 34 0/6 5/6 7. 35 1/6 0/6 8. 40 0/6 0/6 9. 41 0/6 0/6 10. 44 0/5 0/6 11. 45 0/6 0/6 12. 46 0/6 0/6 13. 65 0/6 0/6 14. 69 1/6 0/6 15. 78 0/6 0/6 16. 84 0/6 0/6 17. 94 0/6 0/6 18. 98 0/6 0/6 19. 113 0/6 0/6 * Exponálás ideje: 1 óra. Eredmények: azoknak a 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
