191043. lajstromszámú szabadalom • Eljárás metanol alapú egysejtfehérje előállítására
1 191 043 2 hiden csak gyengén; a metánt nem hasznosítja. Egyéb C-C kötést tartalmazó szubsztrátokon, úgymint különböző cukrokon, szerves savakon, aminosavakon, alkoholokon, szénhidrogéneken, növekedés nem figyelhető meg. Nitrogén források közül legjobban az ammonium sókon növekszik, gyengébben hasznosítja a nitrátokat, a karbamidot, kazein hidrolizátumot és az élesztőkivonatot. A törzs növekedését növekedési faktorok (biotin, thaiamin, élesztőkivonat) nem stimulálják. Az optimális növekedési hőmérséklet 33-36 °C között van, de 25, illetve 39 °C-on is megfigyelhető még növekedés. Az optimális növekedési pH 6,5-7,5 között van, de 5,5 illetve 9 pH értékeknél is elszaporodik még a törzs. Maximális növekedési sebesség 0,6 tf% alatti metanol koncentrációnál érhető el. A törzs maximális specifikus növekedési sebessége folytonos kemosztát elvű kísérletek alapján úmax= 0,691 Ír1 (generációs idő~l óra), az elért legjobb hozam pedig Y = 0,55 g sejt/g metanol. Szubmerz kultúrában a tenyészet alapszíne sárgás-fehér, korlátozott oxigén ellátásnál zöldes, szénforrás nélküli tápoldatban néhány órás éhezés után barnás árnyalatú. Különböző antibiotikumok növekedésre gyakorolt hatását az alábbi táblázatban mutatjuk be. (1. táblázat). 1. táblázat Hatóanyag Hatóanyag mennyisége Növekedésre gyakorolt hatás Gátlási zóna átm. Penicillin 3 NE 0 Oxacillin 10 g 0 Methicillin 20 g 0 Chloramphenicol 30 g 0 Oleandomycin 30 g 0 Streptomycin 30 g 0 Tetracyclin 30 g-2,5cm Oxytetracyclin 30 g-3 cm Chlortetracyclin 30 g-5 cm Neomycin 100 g 0 Polymycin B 15 g-1 cm Erythromycin 10 g-1 cm Vancomycin 50 g 0 Kanamycin 30 g-1,3 cm Spiramycin Novobiocin 30 g 0 Ampicillin 20 g 0 Colistin 20 g 0 Lincomycin 10 g 0 Nevigramon 30 g-1,5 cm Gentamycin 20 g-1 cm Carbenicillin 50 g 0 0 növekedést nem befolyásolja - növekedést gátolja A Methylomonas nov. spec. No. 7-3 jelű törzs biokémiai tulajdonságait az alábbi biokémiai teszt eredményeivel jellemezzük : Hexulózfoszfát-szintetáz (HPS) aktivitás + Hidroxipiruvát-reduktgáz (HPR) aktivitás -Nitrát asszimiláció + Nitrát redukció nitritté + Indoltermelés MeOH-on -Keményítő hidrolízis — H2S termelés -Zselatin elfolyósítás -Aceton termelés + Növekedési faktor igény — Ureáz termelés + Kataláztermelés + Halótolerancia 3% A találmány tárgyát képező fent leírt baktérium törzs morfológiai, növekedési, fiziológiai illetve biokémiai tulajdonságai alapján a BERGEY’S MANUAL of DETERMINATIVE BACTERIOLOGY Sth Edition (Szerkesztette : Buchanan, Gibbons, Cowan, Holt, Liston Murray, Niven, Ravim és Starmer, The Williams and Wilkins Company) szerint a Methylomonas genushoz tartozik. A BERGEY’S kézikönyv szerint a Methylomonas genushoz három nemzetség tartozik: a Methylomotias mechanica, a Methylomonas methanooxidans és a Methylomonas methanitrificans. A találmány tárgyát képező baktérium különbözik a fenti három Methylomonas nemzetségtől, és különbözik az irodalomban eddig leírt metanolhasznosító baktériumoktól is, morfológiai tulajdonságaiban, szénforrás hasznosításában, pigmentképzésben, extracelluláris nyálka képzésben, növekedési hőmérséklet optimumban és növekedés kinetikai jellemzőiben. A találmány tárgyát képező baktérium generációs idejét tekintve közel azonos, a metanolra számított hozamát tekintve jobb, mint az eddig leírt metanol asszimiláló baktérium törzsek. A fermentlé feldolgozását, a sejttömeg kinyerését szűréssel, szeparálással, flokkulációs-, flotációs eljárással, célszerűen ezek kombinációival végezhetjük. Különösen előnyösen oly módon járunk el, hogy a sejttömeg kinyerése előtt a fermentlevet alkáli- és hőkezelésnek vetjük alá, miáltal a termék nukleinsav tartalma 14—15%-ról~ 9%-ra csökken, és ezáltal javul az emészthetősége. A találmány szerinti eljárást az alábbi kiviteli példákkal illusztráljuk, anélkül, hogy a találmányt ezzel korlátoznánk. A fermentációs tápoldat összetétele minden esetben az alábbi sókoncentrációnak felelt meg: iNHJ2S04 5,0 g CaCl2 • 2H20 0,1 g MgS047H20 0,1 g KH2P04 4,7 g Na2HP04 ■ 12H20 13,0 g és nyomelemek. A baktérium mennyisége minden esetben: 2 tf% [4 g/1 sejttartalmú inokulumban]. 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
