190814. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új poliéter típusú antibiotikumok előállítására
1 190 8J4 2 Az LL-C23 024ß jelzésű anyagban feldúsult, az etil-acetát-etil-alkoholos eluálásból származó 177-203. frakciókat egyesítjük, vákuumban bepároljuk, az előzőekben leírt módon kezeljük, ily módon 6,7 g részlegesen tisztított LL-C23 024ß jelölésű anyagot kapunk. Az etil-acetát, etil-alkoholos eluálásból származó, LL-C23 024 v tartalmú 204-213. frakciókat egyesítjük és vákuumban pépesre bepároljuk, ismételten extraháljuk metil-alkohollal, majd a metilalkoholos extraktumot metilén-kloriddal extraháljuk. A metilén-kloridos extraktumot Woelm szilikagéllel töltött oszlopra visszük, az oszlopot metilén-kloriddal mossuk, majd metilén-klorid-etilacetát 2 : 3 arányú elegyével eluáljuk. A frakciókat vékonyrétegkromatográfiás eljárással vizsgáljuk, az aktív frakciókat összegyűjtjük, aktívszénnel kezeljük, bepároljuk és ismételten extraháljuk heptánnal. A kapott heptános extraktumot 48 órán át 0 °C hőmérsékletre hűtve tartjuk, majd a kristályokat kiszűrjük az anyalúgból. Az anyalúgot ezután metilén-kloridban oldjuk, Woelm szilikagéllel töltött oszlopra öntjük és hagyjuk beszívódni. Az oszlopot egymást követően 21 metilén-kloriddal, 81 metilén-klorid-etil-acetát 1 : 1 arányú eleggyel és 41 etil-acetát-metil-alkohol 9 : 1 arányú eleggyel eluáljuk. Az eluátumot frakciónként szedjük és ellenőrizzük antibiotikum-tartalmukat. Az aktív frakciókat egyesítjük, vákuumban bepároljuk, a kapott maradék LL-C23 024 v jelzésű anyagot tartalmaz. 10. példa 3. Az LL-C23 024ß jelölésű anyag további tisztítása szilikagélen végzett kromatográfiával Sephadex® LH20-at hexán-metilén-klorid-metil-alkohol 10 : 5 : 1 arányú elegyében megduzzasztunk. 5 cm átmérőjű üvegoszlopot 86 cm magasságig megtöltünk a géllel. A 3 g LL-C23 024ß jelölésű tisztított anyagot 10 ml metilén-kloridban, 1 ml metil-alkoholban és 10 ml hexánban oldjuk, az oszlopra töltjük és hagyjuk a gélbe beszívódni. Ezt követően az oszlopot a minta felvitelére használttal azonos oldószereleggyel eluáljuk, a frakciókat frakciószedő segítségével gyűjtjük. 23, egyenként 17 ml-es frakciót szedünk. Vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat bizonysága szerint a 17-26. frakciók tartalmazzák az LL-C23 024ß jelzésű anyagot. Ezeket a frakciókat egyesítjük, vákuumban bepároljuk, ily módon 1269 mg tiszta amorf LL-C23 024ß jelzésű anyagot kapunk. 11. példa LL-C23 024ß jelzésű anyag kristályosítása nátriumsó formájában 2,4 g, a 2 és 3 szakasz szerinti eljárással készített, tisztított LL-C23 024ß jelzésű anyagot 500 ml dietil-éter, 160 ml hexán és 25 ml metilén-klorid elegyében oldunk. A kapott oldatot 300 ml desztillált vizet tartalmazó választótölcsérbe visszük. Cseppenként addig adunk hozzá híg hidrogén-kloridoldatot (1 n) amíg a kirázott és elválasztott oldat pH-ja a 2,0-2,5 értéket eléri. A savas vizes fázist döntjük és a savval kezelt szerves fázist háromszor mossuk 400-400 ml vízzel. A vízzel kimosott szerves fázisba teáskanálnyi Darco G-60 port teszünk és 15 perc múlva celiten átszűrjük. A színtelenített szerves fázist 500 ml desztillált vizet tartalmazó választó tölcsérbe visszük, addig csepegtetünk hozzá 5 n nátrium-hidroxidot, míg a kirázott, elválasztott vizes oldat pH-ja a 11,0—11,5 értéket eléri. A lúgos vizes fázist elöntjük, a szerves fázist nátrium-szulfáon szárítjuk, majd vákuumban 150 ml térfogatra bepároljuk. Ezt a koncentrátumot néhány órán át ülkében állni hagyjuk. Az LL-C23 024ß jelölésű anyag kristályait tölcséren gyűjtjük, hideg hexánra! mossuk, levegőn szárítjuk, ily módon 402 mg kristályos LL-C23 024ß-sot kapunk. Ezt a mintát használtuk mikroanalízisre és egyes spektrumok felvételére. Elemzési eredmények a C4eH77017Na képletre: Számított: C% = 59,70, H% = 8,33 0% = 29,46, hamu % = 2,49 Mért: C% = 61,55, H% = 8,79, hamu% = 3,31 N. O. Olvadáspont, Fisher-Johns készülékkel mérve, 174 °C; Téremissziós tömegspektrum: 924; [a]“ = +3,2 metanolban. 12. Példa LL-C23 024 v jelzésű anyag tisztítása Waters Prep. 500A típusú nagynyomású folyadékkromatográfot szilikagél töltettel látunk el, nyomása 3,79 • 10® Pa. A 3. példa szerinti eljárással előállított 5,0 g nyersterméket 50 ml heptán, etilacetát 45 : 55 arányú elegyben oldunk, a szilikagél oszlopra injektáljuk. Az oszlopot azután az anyag oldására használttal azonos oldószereleggyel eluáljuk 200 ml/perc áramlási sebességet alkalmazva, az eluálás során 40, egyenként 200 ml-es frakciót szedünk. A 21-32. frakciókat egyesítjük, szárazra töményítjük, hexánban eldörzsöljük, bepároljuk, ily módon tiszta LL-C23 024 v jelzésű anyagot nyerünk. A leírt eljárást négyszer ismételjük, összesen 280 mg amorf LL-C23 024 v jelzésű anyagot kapunk. 90 mg amorf LL-C23 024 v jelzésű anyagot dietil-éterben oldunk, 10 ml vízzel elegyítjük, pH-ját 0,1 n hidrogén-kloriddal 2,5 értékre állítjuk. Az éteres réteget vízzel mossuk, pH-ját 0,1 n nátriumhidroxiddal 11 értékre állítjuk, elválasztjuk, majd ismét vízzel mossuk. Az éteres fázist nátrium-szulfáton szárítjuk, leszűrjük, szárazra töményítjük. Az így kapott anyagot éter, hexán elegyben oldjuk, az oldószert lassan hagyjuk elpárologni, fehér amorf szilárd anyagot nyerünk. A kapott amorf anyag jellemzői a következők : Elemzési eredmények: C% = 61,79, H% = 8,84, hamu% = 0,32; [a]£ = + 27 (C 0,724, metanolban); Téremissziós tömegspektrum: (M + Na)+ = m/e 953, az ennek alapján számított molekulatömeg 930. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 16
