190803. lajstromszámú szabadalom • Ráksejt elleni limfociták, valamint rákellenes hatóanyagok előállítására, amelyek az említett limfociátkat tartalmazzák
1 2 190 803 10. Teszt példa C57BL/6 egeret bőr alatti oldattal immunizálunk 1 ng (fehérje) GRA-M-3-mal - melyet a 2 (d) tájékoztató példa szerinti eljárással kapunk. A ke- 5 zelést 3 napon át naponta egy alkalommal végezzük és az 5. napon a lépsejteket összegyűjtjük az állatokból, hogy effektor sejteket nyerjünk. Az effektor sejtek és a Lewis tüdőrák (LLC) sejtjeinek, mint célsejteknek a keverékét készítjük el, az arány 1 ® E/T = 50 : 1 ebből egy részt (1 x 10*) ebből átültetünk azonos törzsből származó egerekbe és Winn próbát hajtunk végre. [J. Immunoi. 86, p. 228-239 (1961)]. 16. táblázat Effektor sejtek A daganat növekedési aránya A 20. napon a mortalitás csoportonként 15. nap 17. nap 18. nap 19. nap 20. nap A 5,7 5,5 5,7 3,1 1,4 0/10 B 21,4 39,5 37,1 55,4 76,8 4/10 C 39,3 65,1 61,7 98,1 96,4 4/10 Megjegyzés: Az A csoport lépsejteket jelent a GRA-M-3 immun egérből. A B csoport lépsejteket jelent normál egérből. „„ A C csoport lépsejteket jelent 10 nappal az LLC (1 x 10*) átültetése után egérből. 17. táblázat GRA-M-4 Koncentráció (ng/ml) 3 3H-TdR beépülése (átlag beütés/perc + + standard hiba) S. I. 0 5,302 ±1,761 _ Kontroll 0,5 7,903 ±1,290 1,5 1. 10,076 ± 936 1,9 5. 10,686 ±429 2,0 Kísérlet 20 10,615± 1,270 2,0 40 8,565± 1,419 1,6 Megjegyzés: Az S. I. a stimulációs mutatót jelenti a kísérleti kontroll arányában. 12. Teszt példa A C3H/He normál egér, az X5563 immunis egér, az 5. példa szerinti módon előállított MH134 immunis egér, all. teszt példa szerinti módon előállított, GRA-M-4 immunis egér és GRA-M-5 immunis egér késleltetett típusú hiperszenzitivitási válaszát (DTH) a talppáma reakcióval határozzuk meg (FPR). Azaz GRA-val vagy MMC-vel (mitomicin c) kezelt daganatsejteket juttatunk az állat lábának talppárnájába. A talppárna duzzadását a kezelés után 24 órával határozzuk meg. A DTH válasz fokát úgy számítjuk ki, hogy a talppárna kezelés előtti duzzadási fokát (10-2 mm) kivonjuk a kezelés utáni duzzadási fokból. A kapott eredményeket a 18-22. táblázat mutatja. A tumor növekedést a következő egyenletből | számítjuk : 35 T -T Tumor növekedési arány (%) = -4=—- x 100, Tn ahol a TA a talppáma vastagságát jelenti azon az oldalon, ahol a tumort beültettük és a TN az egész- 40 séges talppáma vastagságát jelenti. 11. Teszt példa 45 C3H/He egeret 4,5 pg (fehérje) GRA-M-4-gyel (amelyet a 2 (d) tájékoztató példa szerint kapunk) valamint 0,1 ml komplett Freund féle adjuvánssal immunizálunk a keresztcsonti régióba történő ol- 5Q tással. Két hét után a nyirokcsomó sejtjeit hagyományos módszerrel összegyűjtjük, és ezeket használjuk válaszoló sejtekként, hogy meghatározzuk a GRA-M-4 által előidézett sejtburjánzási választ. Ez okból a válaszoló sejteket (4 x I05) 15% FCS- 55 et tartalmazó RPMI-1640-ben inkubáljuk GRA-M-4 jelenlétében, 5 napon át. Az inkubálás utolsó 18 órájában periodikusan 1 pCi 3H timidint (3H-TdR) adunk a közegbe és megszámoljuk azokat a sejteket, melyekbe a timidin beépült. A kapott eredményeket a'. 17. táblázat mutatja: " 18. táblázat Kezelés A talppáma duzzadási fokának átlaga (10-2 mm) Normál egér MH134 immunis egér 1 2,8 13,6 2 12,4 32,0 3 3,6 3,6 4 3,2 22,0 5 6,8 27,6 Megjegyzés: 1. csoport, normál lépsejt 1 x 10^/20 pl tápközeg (Hanks oldat) 2. csoport, MH134 sejt 1 x 10®/20 pl tápközeg 3. csoport, 20 pl tápközeg 4. csoport, GRA-M-4, 0,8 pg (fehérje)/20 pl tápközeg 5. csoport, GRA-M-4, 0,4 pg (fehérje)/20 pl tápközeg 19. táblázat Kezelés A talppáma duzzadási fokának átlaga (10~2mm) Normál egér X5563 MH134 Immunis egér Immunis egér 1 5,4 4,3 1,1 2 0,9 24,3 3 2,0 16,9 Megjegyzés: 1. csoport, 20 pl tápközeg (Hanks oldat) 2. csoport, GRA-M-4, 4 pg (fehéije)/20 pl tápközeg 3. csoport, GRA-M-5, 4 pg (fehérje)/20 pl tápközeg 12
