190665. lajstromszámú szabadalom • Eljárás természetes eredetű szterinek oldalláncának szelektív lebontására
190665 I 38,6 g koleszterint feloldunk 450 ml vízmentes aceton és 150 ml vízmentes metilén-klorid elegyében, majd az oldathoz szobahőmérsékleten 20 g triklór-acetil-izocianátol adunk. A reakcióelegyet 2 órán át szobahőmérsékleten, majd 1 órán át + 5 4C-on állni hagyjuk. Ezután a kivált kristályokat leszűrjük, az anyalúgot pedig egytizedére bepároljuk, és a kristályos csapadékot ismét leszűrjük. így 53 g nyers 30-(N-triklór-acetil)karbamoil-oxi-5-koleszténhez jutunk. A nyers terméket aceton: metilén-klorid (5:2) elegyből kristályosítjuk át. Op.: 186-190 ®C; (oclo = -26® (c s 1, kloroform) Infravörös színkép (KBr): \>NH 3280, 3190, 4C = 0 1810, 1770, 1720 cm'*. Protonrezonancia spektrum (CDCU, <5 ): 8,45 s (NH), 5,4 m (H-6), 4,65 m (H-3), 0,86 d, J = 6 Hz (3H-26 + 3H-27), 1,05 s (3H-19), 0,7 s (3H-18) ppm. 53 g 3í-(N-triklór-acetil)-karbamoil-oxi-5-kolesztén nyers terméket 325 ml vízmentes etanol és 200 ml vízmentes metilén-klorid elegyében melegítve feloldunk. Ezután az oldatot 30 ®C-ra hűtjük ás 15 ml acetil-kloridot adunk hozzá, melytől a reakcióelegy felmelegszik. 3 óra állás után ismét 15 ml acetil-kloridot adagolunk be, majd 5 órán keresztül 50 ®C-on tartjuk a reakcióelegy hőmérsékletét. Ezt kővetően 12 órán ét + 5 ®C-on állni hagyjuk a reakcióelegyet, majd a kivált kristályokat leszűrjük. Az anyalűgot egytizedére bepároljuk, és a kivált kristályos csapadékot leszűrjük. Az így kapott egyesített nyersterméket etanol: kloroform: víz (60:10:1) elegyből átkristályositva 32 g 3i-karbamoil-oxi-5-koleszténhez jutunk. Op.: 214-218 ®C; foci® = -38® (c = 1, kloroform). Infravörös színkép (KBr): 0NH 3460, 3340, 3280, 3210, 3170, = 0 (karbamoil) 1710, = C 1605 cm*1. Protonrezonancia spektrum (CDCla, &): 5,42 m (H-6), 4,8 m (NHj), 4,5 m (H-3), 0,86 d, J = 6 Hz (3H-26, 3H-27), 1,08 s (3H-19), 0,7 s (3H-18) ppm. 6' 2. példa 3fl-Karbamoil-oxi-5-andro8ztén-17-on előállítása Az 1. példa szerint járunk el azzal a különbséggel, hogy l g 3í-karbamoil-oxi-5- -kolesztén helyett 1 g 3/j-karbamoil-oxi-5- -sztigmasztént adagolunk a tenyészethez. Az átalakítás eredményeként 180 mg tiszta 3fl-karbamoil-oxi-5-androsztén-17-ont kapunk. A mikrobiológiai átalakítás kiindulási anyagaként felhasznált 3fl-karbamoil-oxi-5- -sztigmasztént az 1. példában leírt módon állítjuk elő azzal a különbséggel, hogy koleszterin helyett ÿ-szitoszterinbôl indulunk ki a karbamoil-származék készítésénél. A 3ú-karbainoil-oxi-5-sztigmasztén olvadáspontja: 206-210 ®C. 3. példa-Kar bamoil-oxi-5,17(20)-pregnadién-20-karbonsav-metilészler előállítása Az 1. példa szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy Mycobacterium phlei (MNG 29) helyett Mycobacterium phlei MPP/f (MNG 197) szuszpenzióval oltunk. A fermentáció befejezése után a fermentlét háromszor 500 ml diklór-metánnal extraháljuk. Az egyesített extraktumokat vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot 100 g kovasavból készített oszlopon növekvő elil-acetát tartalmú etil-acetát-n-heptán elegyekkel kromatografáljuk. A 3a-karbamoil-oxi-5,17(20)-pregnadién-20-karbonsav-metilészter 25% etil-acelát tartalmú n-heptánnal oldódik le az oszlopról. A 30-karbamoil-oxi-5,l?(2O)-pregnadién-2O-karbonsav-metilésztert tartalmazó frakciókat bepárolva 150 mg tiszta terméket kapunk, melyet acetonból kristályosítunk át. Op.: 204-209 ®C. Ultraibolya színkép: Xmax 230 nm. Infravörös színkép (KBrJ^NH 3500 - 3200, n)C = 0 1705, 'JC = C 1610 cm-*. Protonrezonancia spektrum (CDCU, í): 5,35 m (H-6), 4,6 s (NHj), 4,4 m (H-3), 3,63 s (OCHa), 1,9 s (3H-21), 1,02 s, 0,92 s (3H-18 és 311-19) ppm. Tömegspektrum m/e (%): 401 (5), 340 (100), 293 (15), 213 (12), 212 (14), 199 (12), 145 (17), 105 (14), 91 (12). 4. példa 3fi-Hidroxi-5-androsztén-17-on előállítása 330 mg 3ó-karbamoil-oxi-5-androsztén-17-on 5 ml metanolban készült oldatát hozzáadjuk 30 ml, 15% víztartalmú, metanolos 2,5n kálium-hidroxid oldathoz. A reakció elegyet nitrogén atmoszférában 90 percig forró vízfürdőn tartjuk. Ezt követően 30 ml vízzel hígítjuk, majd 6n sósavval pH 7-re savanyítjuk. A semleges oldatból a metanolt desztillálással eltávolítjuk. Az így kapott vizes szuszpenziót háromszor 25 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az extraktumot egyesítjük, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A bepárlási. maradékot vizes etanolból kristályosítva 230 mg 33-hidroxi-5-androsztén-17-ont kapunk. Op.: 149-151 °C; ícclo = +2° (c = 2, kloroform). Infravörös színkép (CHCU): OOH 3440, i)C = 0 1730, vJC = C 1662 cm**. Protonrezonancia spektrum (CDCU, ó): 5,42 m (H-6), 3,55 m (H-3), 1,05 s (3H-19), 0,90 s (3H-18) ppm. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
