190360. lajstromszámú szabadalom • Eljárás makrolid antibiotikumok előállítására
1 .190 360 2 A találmány szerinti makrolidokat rendszerint állatgyógyászati készítmények alakjában alkalmazzuk a terápiában, amikor az aktív makrolid komponenst egy vagy több nem-toxikus vivőanyaggal keverjük össze. Az ilyen készítmények és a vivő- 5 anyagok hagyományos jellegűek és a szakember számára ismertek. Bár a DH-DO-DMT és származékai rendelkeznek egy bizonyos antibakteriális aktivitással, ezek a vegyületek legmegfelelőbben a DH-DO- 10 OMT vegyületek intermedierjeiként használhatók fel. A DH-DO-OMT felületi fertőtlenítésre is felhasználható. Fertőtlenítés .céljából a 0,01 súly% koncentrációjú oldatok használhatók. Az ilyen ol- 15 datok, amelyek előnyösen tartalmaznak egy deter - genst vagy más tisztítószert is, tárgyak és felületek fertőtlenítésére alkalmazhatók, ha fontos a steril körülmények fenntartása. A találmány szerinti eljárás pontosabb illusztrá 20 lása érdekében a következő példákat mutatjuk be I. példa A ) A DH-DO-DMT és a DH-DO-OMT 25 fermentációja rázott lombikban A Str. fradiae ATCC 31 733 tenyészetből egy liofilizált rögöt 1-2 ml steril desztillált vízben szuszpendálunk. Ebből az oldatból 0,5 ml-t használunk 30 fel 150 ml, alábbi összetételű vegetatív táptalaj beoltására : Komponens Mennyiség, % kukoricalekvár 1,0 élesztőkivonat 0,5 szójakorpa 0,5 CaC03 0,03 szójaolaj (nyers) 0,45 ionmentes víz 97,25 Egy másik módszer szerint egy Str. fradiae ATCC 31 733 vegetatív tenyészetet, amelyet 1 ml-es térfogatokban folyékony nitrogénben tároltunk, gyorsan felolvasztunk és ezt használjuk fel a vegetatív közeg beoltására. A beoltott vegetatív tenyészetet 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokban 29 °C-on kb. 48 órán át inkubáljuk, ford./perc mellett. zárt terű rázógépen, 300 Ennek a vegetatív tenyészetnek 0,5 ml-ével 7 ml termelő táptalajt oltunk be, amelynek összetétele a következő : Komponens Mennyiség, % cukorrépamelasz 2,0 kukoricaliszt 1,5 halliszt 0,9 kukoricaglutén 0,9 NaCl 0,1 (NH4)2HP04 0,04 CaC03 0,2 szójaolaj (nyers) 3,0 ionmentes víz 91,36 35 40 45 50 60 65 A beoltott fermentációs táptalajt 50 ml-es lombikokban inkubáljuk 29 °C-on, kb. 6 napon át, zárt terű rázógépen, 300 ford./perc mellett. B) A DH-DO-DMT és a DH-DO-OMT előállítása fermentorban Nagy térfogatú inokulum előállítására 1200 ml inokulált vegetatív tenyészetet - amelyet az A). pontban leírtakhoz hasonló módon állítottunk elő - használunk fel 250 gallon második fázisú vegetatív tenyésztő táptalaj beoltására, amely a következő összetételű : Komponens Mennyiség, % kukoricalekvár 1,0 szójaliszt 0,5 élesztőkivonat 0,5 CaCOj 0,3 szójaolaj (nyers) 0,5 lecitin (nyers) 0,015 VÍZ 97,185 A pH-t 50%-os NaOH oldattal 8,5-re állítjuk be. Ezt a második fázisú vegetatív táptalajt 350 gallonos fermentorban kb. 48 órán át 28 °C-on inkubáljuk, megfelelő levegőztetés és kevertetés mellett. 144 gallon inkubált második fázisú tenyészetet - amelyet az előzők szerint állítottunk elő - használunk fel 1000 gallon steril termelő táptalaj beoltására, amelynek összetétele a következő : Komponens Mennyiség, % halliszt 0,875 kukoricaliszt 1,5 kukoricaglutén 0,875 CaC03 0,2 NaCl 0,1 (NH4)2HP04 0,04 cukorrépamelasz 2,0 szójaolaj (nyers) 3,0 lecitin 0,09 VÍZ 91,32 A pH-t 50%-os NaOH oldattal 7,2-re állítjuk be. Az inokulált termelő táptalaj fermentációját 1800 gallonos fermentorban 8-9 napon át folytatjuk, 28 °C hőmérsékleten. A fermentlevet steril levegővel levegőztetjük annak érdekében, hogy az oldott oxigén szintjét kb. 30% és 50% között tartsuk, és hagyományos keverővei kb. 250 ford./perc sebességgel kevertetjük. 2. példa A DH-DO-DMT és a DH-DO-OMT elkülönítése 38 liter, az 1. példa szerint előállított fermentlevet szűrési segédanyag alkalmazásával szűrjük. A mi-6
