190348. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükoz-izomeráz előállítására
1 328 970. és 1 362 365. számú nagy-britanniai szabadalmi leírások) - a 765. számú Streptomycestörzs glükóz-izomeráz aktivitása nagyobb, pH optimuma (7,0) kedvező, hőmérsékleti optimuma (80 °C) magasabb és hőstabilitása 40-70 °C közötti hőmérsékleteken lényeges. A találmányt az alábbi kiviteli példákban részletesen ismertetjük. /. példa 1. Xilóz-táptalaj: Xilóz 20 g Agar 20 g Kálium-nitrát 1,0 g Dikálium-hidrogén-foszfát 0,5 g Magnézium-szulfát-heptahidrát 0,5 g Nátrium-klorid 0,5 g Kálcium-karbonát 1,0 g Vas(Il)-szulfát-vízzel 0,001 g 1 literre feltöltve. 2. Burgonya-glükóz-agar: 300 g főtt burgo-Burgonyakivonat nyából Glükóz 10 g Agar-vizzel 20 g 1 literre feltöltve. A törzs fenntartása végett ajánlatos mindkét táptalaj váltott alkalmazása. Az 1. vagy 2. (előnyösen az 1.) táptalajpon 10-15 napig növesztett kultúra jól kicsírázott anyagához 6 ml inokulációs táptalajt adunk, amelynek összetétele a következő: xilóz 1%, marhahúskivonat 2%, MgS04 ■ 7 H20 0,1 %, dikálium-hidrogén-foszfát 0,3%. Elvégezzük a sejttömeg öblítését, majd a kémcsövet rázógépen 24 órán át 30 °C hőmérsékleten percenként 240 fordulatszámmal mozgatjuk. Az ilyen módon adaptált tenyészetből oltást végzünk a következő összetételű inokulációs közegre: xilóz 1%, kukoricakivonat 3,0% (szárazanyag), MgS04 • • 7 H20 0,1%, dikálium-hidrogén-foszfát 0,25%, agar 0,1 %. A tenyésztést 50 ml fermentációs táptalajt tartalmazó 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban 30 °C hőmérsékleten 240 percenkénti fordulatszámú rázógépen 60 órán át végezzük. A tenyésztés kezdeti pH értéke 8,5. A 765. számú Streptomyces-törzs 60 órás tenyésztése során 1 liter kultúrafolyadékban 160-240 g nedves biomassza képződik. 2. példa A glükóznak fruktózzá való izomerizálását a 765 számú Streptomyces-törzsből származó glükóz-izomeráz segítségével 70 °C hőmérsékleten, 7,0 pH mellett, 2 • 10~2 mól MgS04 • 7 H20 jelenlétében, 1 mól szubsztrátum-koncentrátcióval hajtjuk végre. A 765. számú Streptomyces-törzs aktivitása 75-130 mg fruktóz 1 ml kultúrafolyadékban, azaz 7000-12 000 GIU 1 liter kultúrafolyadékban. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás glükóz-izomeráz előállítására, azzal jellemezve, hogy enzimtermelő törzsként a Német Demokratikus Köztársaság Állami Gyógyszerellenőrző Intézetében 1979. szeptember 29-én letétbe helyezett 143. letéti számú 765. számú Streptomyces-törzset indukátorként xilózt tartalmazó táptalajon 36-72 órán át tenyésztünk 24-36 °C hőmérsékleten, a tenyészetet a tenyésztés kezdetén 6.5- 9,0 pH értékre beállítva, majd az izomerizálást 50-90 °C hőmérsékleten, 6,0-9,0 pH értéken 1 • 10_4-1 • 10“2 mól MgS04 ■ 7 H20 koncentrációval és 0,1-3 mól szubsztrátum-koncentrációval végezzük. 2 Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 1,0-2,0% xilózt, 1.5- 4,0% (szárazanyag) kukoricakivonatot és 0,25-1,0% nátrium-acetátot tartalmazó táptalajt alkalmazunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 Rajz nélkül
