190340. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az aktaplanin pszeudo-aglikonh-származékának előállítására
1 190 340 2 tonitril koncentráció grandiensét az adott sarzs termékének összetételétől függően kell változtatni ; az előnyös koncentráció gradiens tartomány: 10-40%. Az eluciót ultraibolya elnyelés alapján követjük, és az egyes összetevőket tartalmazó frakciókat egyesitjük. A frakciókról az acetonitrilt nagymértékben csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, és a maradék vizes oldatokat fagyasztva szárítjuk. A fagyasztva szárított frakciókat ezután újra feloldjuk desztillált vízben, és fordított fázisú adszorbensben, például Sep PakR C18 tölteten,** vizes metanollal eluálva kromatografáljuk. Az A-4696 jelzésű antibiotikum egyes összetevőit tartalmazó vizes oldatokról az oldószert ledesztilláljuk, és így az A-4696 jelzésű antibiotikum tisztított összetevőit száraz, amorf, szilárd anyagok formájában nyerjük. * = E. Merck, Darmstadt, Germany. ** = Waters Associates Inc., Milford, Massachusetts. 2. példa Az A-4696 jelzésű antibiotikum pszeudo-aglikon-származéka dihidro-kloridjának előállítása 2,0 g, az 1. példa a) e) lépéseiben leírt módon előállított A-4696 jelzésű antibiotikum-komplexet feloldunk 50 ml, 5%-os metanolos sósav-oldatban, és az oldatot 70 percig forraljuk. Utána az oldószert csökkentett nyomáson, 35-40 *C hőmérsékleten ledesztilláljuk. A maradékhoz kevés vizet adunk, és a kapott szuszpenzióból a szilárd terméket kiszűrjük. E szilárd terméket levegőn szárítjuk, majd feloldjuk kevés metanolban, és acetonitril hozzáadásával szemcsés, szilárd anyag formájában kicsapjuk. Az igy kapott terméket kiszűrjük és megszárítjuk. A termék nagyfelbontású folyadékkromatográfiás vizsgálata azt mutatja, hogy egységes anyag. A termék azonosságát és szerkezetét plazma-deszorpciós tömegspektroszkópiával, magmágneses rezonancia spektroszkópiával és elemi analízissel igazoljuk. Az A-4696 jelzésű antibiotikum pszeudo-aglikon-származékának dihidro-kloridját úgy is előállíthatjuk, hogy az A^4696 jelzésű antibiotikumkomplex egyes összetevőit, vagy ezen összetevők keverékeit enyhe, savas hidrolízisnek vetjük alá. Az A-4696jelzésű antibiotikum pszeudo-aglikon-származékának előállításához kiindulási anyagként használt A-4696 jelzésű antibiotikum egyes összetevőinek elkülönítését Manuel Debono, Kurt E. Merkel, Robert E. Weeks és Herold J. Cole feltalálóknak a jelen bejelentéssel egyidőben benyújtott, 217 962. sorszámú amerikai szabadalmi bejelentés tartalmazza, különösen az A-4696 jelzésű antibiotikum B„ B2, B3, Claés E3 jelzésű összetevőire vonatkozóan. Az egyes összetevők elválasztására és elkülönítésére a jelen leírás 1. példájának f) lépése ad meg egy további lehetséges módszert. Az A-4696jelzésű antibiotikum pszeudo-aglikon-származékának dihidro-kloridjának az A-4696 jelzésű antibiotikum-komplex egyes összetevőiből vagy ezek keverékeiből kiindulva, lényegében ugyanúgy . állítjuk elő, mint ezt a fentiekben a pszeudo-aglikon-származéknak az A-4696 jelzésű antibiotikum-komplexből kiinduló előállítására leírtuk. Az A-4696 jelzésű antibiotikum-komplex egyes 5 összetevőiből, vagy ezek keverékeiből kiindulva kapott pszeudo-aglikon-származékot plazmadeszorpciós tömegspektroszkópiával, magmágneses rezonancia-spektroszkópiával és elemi analizissei azonosítjuk. 10 Az A-4696 jelzésű antibiotikum pszeudo-aglikon-származékának dihidro-kloridja fehér színű, kristályos anyag, amely körülbelül 270 ”C hőmérsékleten elszenesedik. Vízben oldható, más oldószerekben viszont, mint például metanolban, acetonban, dietil-éterben, kloroformban, piridinben, benzolban, alifás szénhidrogénekben és más, hasonlókban oldhatatlan. Körülbelül 1,2 és körülbelül 9,5 közötti pH- 2Q tartományban, és körülbelül 35 °C és 85 °C közötti u hőmérséklet-tartományban stabil vegyület. Az A-4696 jelzésű antibiotikum pszeudo-aglikon-származéka dihidro-kloridjának elemi analízise C66H<slO20NgC1.2HC1.6H2O-ra: 25____________________________________________________ Elem Százalék számított talált szén 52,75 52,75 hidrogén 5,03 5,15 nitrogén 7,45 7,82 klór 7,07 7,17 Az A^4696 jelzésű antibiotikum pszeudo-agli- 5 kon-származéka dihidrokloridjának metanolban, mint oldószerben meghatározott ultraibolya abszorpciós maximuma: 279 nm, E]^n = 63,6. Az A-4696 jelzésű antibiotikum pszeudo-agli- 40 kon-származéka dihidro-kloridjának káliumbromid-pasztillában felvett infravörös abszorpciós spektrumát az 1. ábrán mutatjuk be. A 4000-700 cm"1 tartományban az alábbi, jól megkülönböztethető abszorpciós maximumok találha-45 tók : 3374 széles, 3220, 1728, 1659, 1617, 1592, 1546, 1509, 1489, 1461, 1431, 1355, 1288, 1229, 1208, 1175, 1126, 1103, 1071, 1058, 1014, 986, 897, 880, 843, 816, 767, 731, 710cm"'. 50 3. példa Az A-4696 jelzésű antibiotikum pszeudo-aglikon-származéka szulfátjának 55 . előállítása 2,0 g, az 1. példa a) e) lépésében leírt módon előállított A-4696 jelzésű antibiotikum-komplexet feloldunk 50 ml, 5%-os, metanolos kénsav-oldat- 60 ban, és az oldatot 70 percig forraljuk. Az oldószer ledesztillálása után a maradékhoz kevés vizet adunk, majd az így kapott szilárd anyagot kiszűrjük. A terméket levegőn megszárítjuk, majd kevés metanolban feloldjuk, és acetonitril hozzáadásával 65 szemcsés, szilárd anyag formájában kicsapjuk. Ezt 8
