190340. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az aktaplanin pszeudo-aglikonh-származékának előállítására
1 190 340 2 A kiindulási A-4696jelzésű antibiotikum-komplex termeléséhez előnyösen süllyesztett, levegőztetett tenyésztési körülményeket alkalmazunk. Rázottlombik-tenyészetekben viszonylag kismennyiségü antibiotikumot termelhetünk; nagyobb menynyiségek előállítására viszont előnyösen steril tartályokban, süllyesztett, levegőztetett körülmények között végezzük a tenyésztést. A steril tartályban lévő táptalajt a micélium fragmens szuszpenziójával oltjuk be. Ennek megfelelően kívánatos, hogy második inokulumot állítsunk elő a mikroorganizmusból oly módon, hogy a táptalaj viszonylag kis mennyiségét beoltjuk a mikroorganizmus micélium fragmensével, és amikor így egy fiatal második inókulumot kapunk, ezt steril körülmények között átviszszük a nagyobb méretű tartályba. A második inokulum előállításához használt táptalaj lehet azonos azzal, amelyet a nagyobb léptékű tenyésztéshez is használunk, de alkalmazhatunk más táptalajokat is. Az ATCC 31 683 jelzésű Actinoplanes missouriensis törzs 20 °C és 40 °C közötti hőmérsékleten növekszik, a kiindulási A-4696 jelzésű antibiotikum termelése viszont körülbelül 30 °C hőmérsékleten a legnagyobb mértékű. A süllyesztett, levegőztetett tenyésztési eljárás során a táptalajba steril levegőt buborékoltatunk. A táptalajba vezetett levegő mennyisége a táptalaj térfogategységére számítva percenkéht körülbelül 0,1 térfogategység és körübelül 1,0 térfogategység között van. A mikroorganizmus növekedése és az antibiotikum termelése akkor a legerőteljesebb, ha a táptalajba vezetett levegő mennyisége a táptalaj térfogategységére számítva percenként legalább 1/2 térfogategység. Az antibiotikum termelésének sebességét és a táptalajban való koncentrációját a tenyésztés során úgy követhetjük, hogy meghatározzuk a táptalajból vett minták antibiotikus aktivitását olyan mikroorganizmusokkal szemben, amelyekről tudjuk, hogy a termelt antibiotikumra érzékenyek. Ilyen, a meghatározáshoz használható mikroorganizmus például a Bacillus subtilis. A biológiai értékmérést ismert módszerrel, vagy agarlemezeken, papírkorong-módszerrel végezzük. Az antibiotikum legnagyobb mennyisége rázottlombikban, vagy süllyesztett, levegőztetett tenyésztés során általában körülbelül 4-6 nap alatt halmozódik fel. Az A-4696 jelzésű antibiotikum pszeudo-aglikon-származékának előállításához kiindulási anyagként felhasznált A-4696 jelzésű antibiotikum-komplexet táptalajból úgy különíthetjük el és választhatjuk el az esetleg jelenlévő egyéb anyagoktól, hogy adszorpciós és kirázásos módszereket alkalmazunk. Előnyösen adszorpciós módszereket alkalmazunk, miután ez esetben nem szükséges a kirázásos módszerekben alkalmazott nagymennyiségű oldószerekkel dolgoznunk. Az A-4696 jelzésű antibiotikum pszeudo-aglikon-származékának a jelen találmány szerinti előállítási eljárását az alábbiakban, a találmány oltalmi körének szűkítése nélkül, példákkal szemléltetjük. /. példa Az A-4696jelzésű antibiotikum pszeudo-aglikon-származékának előállításához kiindulási anyagként használt A-4696 jelzésű antibiotikum komplexnek, és e komplex egyes összetevőinek előállítása. a) lépés Tenyésztés rázott lombikban Az ATCC 31 683 jelzésű Actinoplanes missouriensis törzs micélium fragmensét az alábbi összetételű ferdeagarra oltjuk: összetevő . Mennyiség cerelóz 0,5% burgonya-dextrin 2,0% szójaliszt 1,5% élesztőkivonat 0,25% kalcium-karbonát 0,1% agar 2,0% Az ATCC 31 683 jelzésű törzzsel beoltott ferdeagart 6 napig 30'C hőmérsékleten- tartjuk. A tenyészet nem spórázik, ezért a micéliumot egy steril pipettával szét kell dörzsölni. A szétdörzsölt, érett tenyészetet steril desztillált vízzel fedjük, és pipettával vagy steril üvegbottal óvatosan eldörzsölve a micéliumot felszuszpendáljuk. Az így kapott szuszpenzióval beoltunk 100 ml, alábbi összetételű, steril, vegetatív táptalajt: összetevő Mennyiség cerelóz 0,5% burgonya-dextrin 2,0% szójaliszt* 1,5% élesztőkivonat 0,25% kalcium-karbonát 0,1% • * = Archer Daniels Midland Company, 4666 Faries Parkway, Decatur, Illinois 62 526. A beoltott vegetatív táptalajt 48 órán át 30 *C hőmérsékleten egy percenkénti 250 fordulatszámú, forgó rendszerű rázóasztalon rázatjuk. Utána ennek a vegetatív táptalajnak 10 ml-nyi mennyiségével beoltunk 100 ml alábbi összetételű, steril, fő fermentációs táptalajt: összetevő Mennyiség cerelóz 0,5% élesztő 0,25% szójaliszt 1,5% kukoricakeményítő 2,0% kalcium-karbonát 0,1% Sag 471* 0,05% ' * = A Sag 471 egy jól ismert szilikon-alapú, habzásgátló szer, amely az Union Carbide Companytól szerezhető be, 120 Riverside Plaza, Chicago, Illinois 60 606. 5 10-15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
