190141. lajstromszámú szabadalom • Eljárás klavin-tipusú anyarozs-alkaloidok előállítására
5 190141 6 vagy anélkül ismételjük, és a kapott új variáns törzset, mely legalább 85%-ban elimoklavint termel, elkülönítjük. A találmány szerinti eljárás értelmében a kiindulási MNG 00164 számon deponált törzset valamely agar-tartalmú szilárd táptalajon tenyésztjük. A célra alkalmas táptalaj-összetételek egyebek mellett a következők: „A" - táptalaj: Szacharóz 100.0 g 1-aszparagin 10.0 g kalcium-nitrát 1.0 g kálium-dihidrogén-foszfát 0.25 g magnézium-szulfát 0.25 g kálium-klorid 0.125 g vas(II)-szulfát 0.033 g cinkszulfát 0.027 g 1-cisztein-hidroklorid 0.010 g élesztőkivonat (Difco) 0.100 g agar-agar (Difco) 30.0 g pH 5,2 (NaOH-val állítva). A felsorolt összetevőket 50-60 #C-on csapvízben 1 literre oldjuk, majd az oldatot 110 *C-on 30 percig sterllezzük. A kapott táptalajt lehűtve az megszilárdul. „B” - táptalaj: 39 g burgonya-glükóz agárból (Difco) az „A "-táp talajhoz hasonlóan 1 liter táptalajt főzünk. „C” - táptalaj: Szacharóz 100.0 g borostyánkősav 10.0 g kalcium-nitrát 1.0 g ammónium-nitrát 1.0 g kálium-dihidrogén-foszfát 0.25 g magnézium-szulfát 0.25 g kálium-klorid 0.125 g vas(II)-8zulfát 0.009 g cinkszulfát 0.003 g agar-agar (Difco) 30.0 g pH 5,5-5,6 (NHtOH-dal állítva). A felsorolt összetevőkből az „A”-táptalajhoz hasonlóan 1 liter táptalajt főzünk. „D" - táptalaj: Glicerin 100 g 15 pepton (Difco) 20 g agar-agar (Difco) 30 g A komponenseket 50-60 #C-on 1 liter csapvízben oldjuk, az oldat pH-ját 6,5-6,8-ra állítjuk, majd 110 °C-on 30 percig sterilez- 20 zűk. A felsorolt táptalajok valamelyikén steril, aerob kürőlmények között 20-28 #C hőmérsékleten, 1 liter táptalajra számított 0,5- 10 mmól mennyiségben adagolt, a citokróm P- 25 450 képződést elősegítő barbiturát-tipusú adalékanyag jelenlétében végezzük a tenyésztést. Barbiturát-tipusú adalékként elsősorban N-fenil-barbiturátok, így fenobarbitál vagy metilfenobarbitál továbbá hexobar- 30 bitál jöhet számításba. A tenyésztést általában 7-21 napon ét végezzük, majd az új törzs telepeit elkülönítjük. Az alábbi táblázatban felsoroljuk a kiindulási kultúrát és az új törzset megkülőn- 35 böztető főbb morfológiai és biokémiai jellemzőket: Morfológiai jelleg telepmorfológia MNG 00164 MNG 00211 C-jelû, agarral szilárdított tápláljon a 21. napon (2. és 3.. ábra) 10-15 mm-e8 dúsan redőzőtt éles szélű drappos színű telep (2. ábra) 15-20 mm-es lapos, légmicéliumos, éles szélű, lilás színű telep (3. ábra) Szubmerz tenyészetben C-jelú táptalajon a 12. napon: a) mikroszkópos megjelenés drappos színű, vattás viszkózus tenyészet barnás-lila színű laza, pelyhes tenyészet b) mikroszkópos kép 12-15 p hosszú és 3-6 p vastag sejtek hosszú, gyakran fonatokat képző hifák 6-10 p hosszú és 3-6 p vastag sejtek hosszú, gyakran fonatokat képző hifák Biokémiai jelleg Fenobarbital tolerancia: a) agar táptalajon b) folyékony táptalajon 1 mmól/liter 0.6 mmól/liter 10 mmól/liter 5 mmól/liter Citokróm P-450 tartalom C-jelű táptalajon 4-7. napon nmól/g száraz sejttömeg 1.0-1.5 2.5-3.0 4
