190129. lajstromszámú szabadalom • Eljárás karboxi-peptidáz b enzim elkülönítésére emlősők hasnyálmirigyéből
8 190129 9 nium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 317 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 20,3 mól hippuril-L-arginin hidrolízise(perc)mg fehérje. 7. példa 0,3 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 300 ml 0,05 mólos foszfát puffert (pH=6,0), a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel éB 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszóhoz 301 g ammóniumszulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszóhoz - a pH=7,0-7.2-re állítása után - 252,6 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 517 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 57 /umól hippuril-L-arginin hidrolízise(perc)mg fehérje. 8. példa 0,3 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakén át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 300 ml 0,05 mólos foszfát puffert (pH=6,5), a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszóhoz 326 g aminónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszóhoz - a pH=7,0-7,2-re állítás után - 275,5 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrjük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 361 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 43,8 pmól hippuril-L-arginin hidrolizise(perc)mg fehérje. 9. példa 0,3 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 300 ml 0,05 mólos foszfát puffert (pH=7,0), a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszóhoz 326 g animónimii-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszóhoz - a pH=7,0-7,2-re állítása után -272 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentésre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 488 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 39,9 jumól hippuril-L-arginin hidrolízise(porc)mg fehérje. 10. példa 0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos Tris-HCl puffert (pH=7,5), a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszóhoz 247 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszóhoz - a pIlc7,0-7,2-re állítása után -202 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg ( + 4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH-'7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 695 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 17,4 /urnái hippuril-L-arginin hidrolízise (perc.)mg fehérje. 11. példa 0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos Tris-HCl puffert. (pH=8,0), a szuszpenziót 60 "C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszóhoz 255 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszóhoz - a pH=7,0-7,2-re állítása után - 198 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pHz7,0) feloldottuk és desztillált. vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
