190118. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cukorgyári répaszelet biológiai tartósítására alkalmas laktobacillus fermentlevek előállítására
4 190118 5 0.2 g magnézium-szulfát, krist. 0.05 g mangán-szulfát 1 ml TWEEN-80 15 g agar. A talaj pH-ját 20%-os ecetsavval 5.2-re állítjuk be. A szokásos MRS tenyésztési technikával a találmány szerint, módosított talajon az inkubáláR után kapott telepeket a Lactobacillus brevis morfológiai jellemzőire elbírálva, az agartápLalajjal megegyező fenti összetételű olyan táplevesekben szaporítjuk 20-50 ml-es térfogatig, amelyben nincB agar, viszont maltóz és xilóz a szénhidrátforrás. Ez az eljárás nagy biztonsággal a Lactobacillus brevis törzset eredményezi. A kiindulóanyagban esetleg jelenlevő 5,2 pH-n nem szaporodó, szacharózt, maltózt és xilózt erjeszteni képtelen egyéb laktobacitlus faj a találmány szerinti tenyésztési eljárással biztosan kiszorítható. A törzs felszaporítása Az izolálás során nyert 20-50 ml-es tenyészetet, 1%-os inokulumarány betartásával a következő összetételű tápoldat sűrítményeket a) kálim-kiorid 1-22,0 tőmeg%; ammónium-klorid 0,5-5,0 tömeg%; krist. magnézium-szulfát 0,5-4,0 tömegX; trinátrium-foszfát 0,1-2,0 tömog%; mangán-szulfát 0,01-0,5 tömeg X; lenzides autók Iá vozással készült 15-30 lömeg% szárazanyagtartalmú élesztófőzet 57-98 térf.%; vagy b) kálium-klorid 1-13 tömegX; ammónium-klorid 0,5-5,0 tömegX; mangán-szulfát 0,05-0,2 tömegX; cslraszegány savópor 30-80 tömegX; 15-30 tömegX szárazanyagtartalmú élesztöföeet 30-80 lárf.X; és cukorgyári finomított szacharózt tartalmazó tápoldatbari szaporítjuk fel. A tápoldat 1000 1-re számítva 20 kg finomított kristálycukrot és 14 kg tápoldatsűrítményt tartalmaz. Az oldat pH-jál ecelsavval 5,2-re állítjuk be, a szaporítás kigőzölt folyadéküvegekben 25-28 ®C hőmérsékleten történhet. A kialakított sóösszetétel a Lactobacillus brevis ionkôzeg iránti igényét, a lenzides főzéssel előállított élesztófőzet pedig a biosz-anyagok és peplidek iránti igényét előnyösen kielégíti. Ebben a fázisban nincs szükség laboratóriumi tisztaságú (p.a.) anyagok használatára. Technikai minőségű anyagokat, így például ivóvíz minőségű vizet, alkalmazhatunk. Ipari méretű fermentáció A felszaporítás során nyert, lOVcm3 baktériumkoncentrációjú inokulumtenyészetek a fermentációs végtérfogatra számított 1%-nyi mennyiségeivel 500-1500 literes ovál poliészter folyadék tartályokban fermentációt indíthatunk 25 "C körüli hömrsékleten, olyan tápoldatban, amely szénhidrátként finomított cukrot, nítrogénforrásként feltárt elölt élesztőt, savóport és ezek mellett a laktobacillusck szaporodásához szükséges ionösszetélelt tartalmazza. A tápoldal pH-jót 5,2-re állítjuk be. A felhasznált anyagok könnyen hozzáférhetők, olcsók, jól raktározhatok. A lenzides, feltárt élesztófőzet gyáron belül 3-1 órás almaszférikus nyomáson, illetve fél órás autoktávban végzett főzéssel állítható elő. Anaerob körülményeket biztosítva keveréssel vagy anélkül 72 óra után a fermenllé rrikrof tóráját morfológiailag vizsgáljuk, baklériumezámál és pH-ját ellenőrizzük és szivattyúval vagy gravitációs úton a kihordólánc végén 1 1/tonna mennyiségben a nedves cukorrépaszeletre permetezzük. A találmány szerinti eljárás előnyei a következők:- A Lactobacillus brevis törzs izolálásától kezdve a cukorgyárban megvalósítható;- olcsó és iparilag hozzáférhető alapanyagokat igényel;- folyamatosan szolgáltat friss, maximális szaporodó képességű baktériumtömeget;- a savós vagy szilárd kultúrás répaszelet kezelésre alkalmas technológiai feltételek mellett lényeges, új beruházás nélkül megvalósítható. A találmány szerinti eljárást a következő példákon mutatjuk be. 1. példa A törzs izolálása Savanyűkáposzta léből steril desztillált vízzel decimális hígilási sort készítünk, majd minden egyes hígítás 1 ml-ét 10 ml, 35-40 °C hőmérsékletű alábbi összetételű, a találmány szerint módosított, MRS talajjal rázás nélkül elkeverjük: 10 g pepton 8 g Iriplon 4 g élesz Löki vonal 20 g szacharóz 1.6 g citromsav 5 g krist. nátrium-acélát 1.4 g dikálium-hidrogén-foszfát 1.5 g diaminónium-hidrogén-foszfál 1.2 g kálium-hidroxid 0.2 g krist. magnézium-szulfát 0.05 g mangán-szulfát 1 ml TWEEN-80 15 g agar; ecetsavval a pH-t 5,2-re állítjuk be. Az így beoltott talajmintákat 80-100 átmérőjű steril Petri-cséazékbe töltjük, majd a kitermelés után steril folyékony talajból 2-3 nini-es záróréteget öntünk rá. 37 °C-on 72 óra után az agarrélegben megjelenő apró, fehér tollpihére emlékeztető alakú telepek 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 6C 65
