190077. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nigericin tartalmú fermentlevek feldolgozására

2 190077 3 Találmányunk tárgy javított eljárás fer­mentációs úton képződő nigericin kinyerésé­re, a ferraentléból kiszúrt micélium alkoholos extrakciójával, azt kővető sóképzéssel és kristályosítással. A nigericin régóta ismert antibiotikum, már 1951-ben feltalálták. [Antibiotics and Chemotherapy 1, 594 (1951)]. A szakirodalomban a később leirt polie­­terin A, [J. Antibiotics 21, 402 (1968)], X­­-464,- és K-178 jelű antibiotikumok, és az azalomycin M,- és helexin C néven leírt anti­biotikumok [Biochemical and Biophysical Res, Commun. 33, 29 (1968)], mint azt a további vizsgálatok bizonyították, a nigericinnel azo­nosnak bizonyultak. A nigericin az állatgyógyászatban cocci­­diosis elleni szerként használatos (3 555 150 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás). Alkalmazása orálisan takarmányban adagolva, vagy poralakban történik. A mikrobiológiai úton termelt nigericint, a 3 794 732 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint a fermentlé szűrése után nyert micéliumból nyerték ki, oly mó­don, hogy a hatóanyagot me til- alkohollal ext­rahálták, az extraktumot betöményítették, majd a vizes sűrítményből a nigericint butil­­-acetáttal extrahálták. Az oldószeres fázist mosták vizes dikálium-hidrogén-foszfát oldat­tal, vízzel, és a maradék bepárlása után egy olajos terméket nyertek. Az olajos maradékot petroléterrel extrahálták, és az oldószer el­­párologtatása után visszamaradt olajos anya­got két lépésben extrahálták, először metil­­-alkohol és petroléter elegyével, majd 90%-os metil-alkohollal. Az így nyert extraktumokat egyesítették, bepárolták. A maradékot ben­zolban oldották, és aktivált alumínium-oxiddal töltött oszlopon adszorbeáltatták. A szelektív leoldáshoz benzolt, benzol és dietil-éter ele­­gyét, illetve dietil-éter és etil-alkohol ele­­gyét alkalmazták. Más eljárás szerint [J. Antibiotics 21, 402 (1968), és 7 009 235 sz. japán szabadalmi leírás] a nigericint a metil-alkoholos extrak­­tum bepárlása után nyert sűrítményből klo­­roformos fázisba vitték, majd többszöri me­­til-alkohol-viz-kloroformos extrakcióval tisz­tították. A fermentáció során képződött olajos melléktermékektől nagy anyagveszteséggel járó, bonyolult oszlopkromatográfiás eljárással szabadultak meg. Ezek az eljárások körülményesek és nagy anyagfelhasználással járnak, ipari mé­retben csak nehezen valósíthatók meg. A leí­rásokban a szerzők kitermelési adatokat nem adtak meg. A 165 926 és 166 408 sz. magyar szaba­dalmi leírásokban egy Streptomyces albus törzzsel végrehajtott fermentációt és a kép­ződő nigericin egyszerű módszerrel történő kinyerését írták le. Találmányuk alapja az a felismerés, hogy ha a micéliumot lúgos metil­­-alkohollal extrahálják, betóményítik és a sű­rítményt vízzel hígítják, a nigericin az oldat­ból kiválik. Az eljárás előnye egyszerűségében rej­lik. Hátránya, hogy a vizes oldatból a nigeri­cinnel együtt kiválnak a fermentáció során képződött olajos melléktermékek, s az igy ki­nyert nigericin-alkálisó gyógyászati célra közvetlenül nem alkalmas. Átkristályosítéssal és/vagy oszlopkromatográfiás úton tovább kell tisztítani, a megfelelő minőségű termék előállítása céljából. Munkánk célja olyan eljárás kidolgozása volt, amely az állatgyógyászati célra megfele­lő minőségű nigericin előállítását az eddig al­kalmazott eljárásoknál egyszerűbben iparilag megvalósítható formában gazdaságosabban valósítja meg. Találmányunk alapja az a felismerés, hogy a fermentléből a micéliumot szűréssel eltávolítva, és a nedves micéliumból a ható­anyagot alacsony szénatomszámú alkohollal kioldva, az oldatot 20-50% alkohol tartalomig bepárolva, a~í"homogén oldatban alkáli-fém­­-hidroxiddal sót képezve, majd az oldatot kí­vánt esetben melegen aktív szénnel derítve, (szlntelenítés és olajmegkötés céljából) a nyert alkoholos oldatból hűtéssel és kevés ionmentes viz adagolásával a nigericin alkáli­só leválasztható, és a kiváló termék szűrés és mosás után gyógyászati célra megfelelő tisztaságú. Az olajos melléktermékek, amelyek az eddig ismert eljárásoknál a termék szeny­­nyeződését eredményezik, szürhetóségét is minőségét rontják, eljárásunkat alkalmazva az alkoholos anyalúgban és a kívánt esetben alkalmazott derítő szénben maradnak. Az anyalúgból alkohol-mentesítés után kiváló olajos, erősen szennyezett nigericin ismert módon kristályosítással tisztítható. Felismerésünk szerint a hatóanyag ext­­rakciója alacsony szénatomszámú alifás alko­hollal vitelezhetö ki, előnyösen a micélium tö­megére számított 2-5-szörös oldószer térfogat használatával. Kísérleteink alapján az extrak­­cióhoz legelőnyösebbnek az etil- és i-propil­­-alkohol alkalmazása bizonyult, 'az azeotróp elegy desztillációval történő térfogatcsökke­nése hatására sem válnak ki az olajos termé­kek, mint a metanol alkalmazása esetében. Eljárásunk alkalmas különböző mennyi­ségű (1000-10 000 (ug/cm3) nigericint tartal­masó fermentlevek feldolgozására 60-70% ki­hozatallal. Az eljárás előnye az ismertetett módsze­rekkel szemben, hogy így egyszerű módon, egy lépésben állatgyógyászati célnak megfe­leld tisztaságú nigericin-alkálisót tudunk ki­nyerni a fermentléből, és nincs szükség köl-séges oszlopkromatográfiás tisztítás al­kalmazására. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákban mutatjuk be részletesen anélkül, hogy találmányunkat ezekre korlátoznánk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3

Next

/
Thumbnails
Contents