190070. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a gyökérrontó tapló ellen alkalmazható bioaktív készítmény előállítására fermentáció útján
6 190070 7 A tömeges spóratermeléshez legalkalmasabb törzs tehát a 15/3 jelű törzs volt, és ezt a törzset az OKI-nál 00240 szám alatt letétbe helyeztük. Találmányunk azonban nem ezen egy törzs alkalmazására korlátozódik, mert a fenti táblázatból kitűnik, hogy megfelelően kiválasztott és kezelt más Peniophora gigantea törzzsel is a tuskókezeléshez alkalmas sűrűségű spóraszuszpenziót lehet előállítani. A spóraszuszpenziót steril körülmények között kiszereljük; ebben az állapotban a termék +5 °C-on több hónapig tárolható. Amennyiben a spóraszuszpenziót szárítjuk, kímélő körülményeket kell alkalmazni, hogy a gomba spórák meg ne károsodjanak. Megfelelő szárítási mód a liofilezés, de alkalmazhatjuk például a Glatt féle száritót (gyártja: Glatt, svájci cég) is. Szárítás előtt védőkolloidot adunk a tenyészléhez. Védőkolloidként lósavót, melaszt vagy karboximetilcellulózt alkalmazhatunk. A legjobb eredményt a karboximetilcellulóz ad. A liofilizált, illetve porrá szárított készítmény 1 g-ja 2 milliárd spórát tartalmaz. A por alakú készítményt műanyag zacskókban csomagolva és légmentesen elzárva +4 °C-on hónapokig, -15 °C-on évekig eltartható károsodás nélkül. A gyökérrontó tapló elleni védekezés céljából a fentiek szerint kapott tenyészlét vagy az abból nyert port a favágás során keletkező tuskó vágáslapjára juttatjuk. Előnyösen a tenyészlét 105-106 spóra/inl koncentrációra hígítjuk és ecseteléssel vagy permetezővel visszük fel a vágáslapra, lehetőleg a vágást követően azonnal vagy legalább 24 órán belül. Ezt a kijuttatási módot főleg olyan helyeken alkalmazzuk, ahol a tisztítást fejszével vagy szárzúzó hengerrel végzik. Célszerűen valamilyen színező anyagot, például krétát keverünk a készítmény vizes hígításához; megszáradás után a kezelt felület fehér lesz, így könnyen megállapítható, melyek tuskó kezelt már és melyik még nem. Előnyös az is, ha a por alapú készítményt a motorfűrész lánckenő olajába keverjük, így a vágással egy lépésben kerülnek a spórák .a tuskó felületére. Ennek két előnye is van:- nem kell állandó felügyeletet gyakorolni, hogy a kezelést tényleg elvégezték-e avagy sem (a nagy területekre való tekintettel ez nem is lehetséges);- a kezelés külön műveletet jelent, tehát többlet munkaerőt igényel, míg ha a készítményt a lánckenő olajba adagoljuk, a vágással együtt a kezelés is megtörténik. Egy liter lánckenő olajhoz mintegy 2- -5 g liofilizált port keverünk. Ezzel a menynyiséggel 100%-os biztonsággal lehet a tüsköt megfertőzni a Peniophora terülógombával. A két technológia (vizes és olajos) között csak a megeredésben van bizonyos időbeli különbség a vizes kezelés javára, máskülönben eredményessegük azonos. A találmányt az alábbi példákkal közelebbről ismertetjük. 7. példa Tiszta Peniophora gigantea tenyészet izolálása Sarangolt tönkökről vagy nevelő vágásokról a kéregre terülő termőtesteket leválasztjuk és laboratóriumban nedves kamrába helyezzük (a nedves kamra nedves papírvattával kibélelt Petri-csésze lehet). A petri-csészében steril tárgylemezre borítjuk a begyűjtött gombákat, a himenális résszel lefelé, és ott hagyjuk egy napig. A tárgylemezt ezután a spórákkal együtt kiemeljük és steril vízzel lemossuk. A kapott spóraszuszpenziót szilárd táptalajon, malátás agaron szélesztjük és megtisztítjuk, a pH 4,5-5. A mikrobiológiailag tiszta felületi kultúrát inokulum készítésére használjuk fel. 2. példa Inokulum előkészítése Az 1. példa szerint előállított kultúra 20 °C-on mintegy 3 hónapig tárolható. 15 nap elteltével a tenyészetről már le lehet mosni a spórákat. A kapott spóraszuszpenzió nem tárolható, azt néhány órán belül fel kell használni inokulum oltásra. 3. példa Inokulum oltása Az alábbi összetételű tápközeg kristálycukor 1.0% f.mmónium-tar tarát 0.2% kukoricalekvár por 0.1% (kukoricalekvár: 0.2%) sörélesztő 0.03% KH2PO4 0.05% MgSCú 0.02% nyomelem 1.0% ) 'hylamalt 4.0% nyomelemoldat: MgSOí 10 g MnSOí 10 g ad 1000 ml FeS04 10 g csapvizzel ZnS04 10 g bórsav 10 g 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
