189979. lajstromszámú szabadalom • Eljárás makrolid antibiotikumok előállítására
1 2 189 979 adunk minden esetben,' 1,0%-os mennyiségben. A lemezeket 30°C-on tenyésztettük, & a 7-12. napon olvastuk le. V, Táblázat, Egyéb élettant tulajdonságok E-2724.1 ISP# 1 (kromogenitás) ISP/jf 6 (kromogenitás) ISP/jl 7 (kromogenitás) zselatin-elfolyósítás fölözött tej-reakció növekedés különböző értékeken1 különböző hőmérsék-1 4 nátrium-klorid tolerancia ’ keményítő hidrolízis nitrát-redukció kataláz" , foszfatáz0 ureáz” 6,1-8,8 10-37°C 8% + NRRL 12171 6,1-7,8 10-30°C 4% 1 * ISP ft 2 táptalajon (élesztő kivonat-maláta kivonat-agar), 7 napon át inkubálva. 2 =0,05 mólos, alábbi puffereket használtunk: citromsav, pH 3,4,5, 2-(N-morfolino)-etán-szulfonsav, pH 6, 3-(N-morfolino)-propán-szulfonsav, pH 7, N-2-hidroxi-etil-piperazin-N’-2-etán^zulfonsav, pH 8, 2-amino-2-(hidroxi-metiI)-l ^-propán -diói, pH 9, 3-ciklohexil-amino-l ,1 -propán-szulfonsav pH 10,11. V. Táblázat (folytatás) Az agar táptalajok pH-ját 7 napos inkubációt követően megmértük, mivel egyes pufferek nem tartották az eredetileg beállított pH-értéket. A puffer toxicitását oly módon vizsgáltuk, hogy az összes puffer pH-ját 7,0-ra állítottuk be, és vizsgáltuk a növekedést. Toxicitást nem figyeltünk meg. 3 = 5,10.15,20,25,30,37,40,45, 50 és 55°C hőmérsékleten vizsgáltuk. ^ = Az agárhoz nátrium-kloridot adtunk, 0, 2, 4, 6, 8,10 és 12%-os koncentrációban. 3 = A keményítő hidrolízisét szervetlen só-keményítő-agaron (SP =/ 4) vizsgáltuk oly módon, hogy a jelenlévő keményítőt jóddal mutattuk ki. ® = Az enzim méréséhez Blazovic és Ederer módszerét használtuk (Blazovic és Ederer, Principles of Biochemical Tests in Diagnostic Microbiology, John, Wiley and Sons, New York, N. Y., 1975.) Az előző tulajdonságok alapján a DMOT- és dihidro-DMOT-t termelő 12171 mikroorganizmust a Streptomyces fradiae új törzsének határoztuk meg. A tenyészetet letétbe helyeztük a Northern Regional Research Center, Agricultural Research, North Central Region, 1815 North University Street, Peoria, Minois, 61604 törzsgyűjteményében, ahonnan az NRRL 12171 szám alatt hozzáférhető. Ahogy az más mikroorganizmusoknál is előfordul. a Streptomyces fradiae NRRL 12171 -tulajdon--5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ságai variálnak. Így például az NRRL 12171 törzs mesterséges variánsai és mutánsai állíthatók elő oly módon, hogy a sejteket különböző ismert fizikai és kémiai mutagénekkel kezeljük, például ultraibolya sugarakkal, X-sugarakkal, gamma-sugarakkal, és N-metil-N’-nitro-N-nitrozó-guanidinnel. A találmány oltali köréhez tartoznak a Streptomyces fradiae 12171 összes természetes és mesterséges variánsai, mutánsai és rekombinánsai, amelyek termelik a DMOT-t. A DMOT vegyületek gátolják a patogén baktériumok, különösen a Gram-pozitív festődésű baktériumok és a Mycoplasma fajok növekedését. A VI táblázatban összefoglaljuk az ismert agarhígításos módszerrel meghatározott legkisebb növekedésgátló koncentrációkat, amely koncentrációk mellett a DMOT szabad bázis alakban gátolja bizonyos baktériumok növekedését. VI. Táblázat A DMOT szabad bázis in vitro aktivitása Mikroorganizmus Legkiset növekedésgátló konccentráció (jug/ml) Streptococcus pyogenes C203 0,25 Streptococcus pneumoniae Park I 0,13 Streptococcus sp. (D csoport) 282 0,5 Staphylococcus aureus 3055 1,0 Pasteurella múltoddá 6,25 Pasteurella hemolytica 25,00 Mycoplasma gallisepticum 0,097 Mycoplasma hyopneumoniae 0,39 Mycoplasma hyorhinis 0,78 A találmány szerinti DMOT-vegyületek in vivo baktériumellenes aktivitással rendelkeznek kísérleti bakteriális fertőzésekkor. Ha egereknek kísérleti fertőzéskor két dózisban adjuk a vizsgált vegyületeket, az aktivitást ED^Q-értékben határozhatjuk meg (hatásos dózis mg/testsűlykilogrammban, amely a vizsgált állatok 50%-át megvédi: lásd Wide és munkatársai, J. Bacteriol., 81, 233—235, 1961). A VII. táblázatban megadjuk a DMOT vizsgálatakor kapott ED^-ért ékeket. VII. Táblázat A DMOTED50-értékea Vizsgált vegyület DMOT szabad bázis bakteriális fertőzés (xLD^) a = szubkután adagolás, mg/kg, x 2. A szárnyasok Mycoplasma fertőzéseinek megakadályozására vagy kezelésére az állatoknak orálisan vagy parenterálisan nem-toxikus, hatásos mennyiségben adagoljuk a DMOT-t. A DMOT-vegyületeket előnyösen gyógyszerészeti szempontból elfogadható vívőanyaggal, például vizzel együtt adagoljuk az állatoknak. A találmány szerinti eljárást a továbbiakban példákkal szemléltetjük. 1. példa A) A DMOT előállítása a rázott lombikban klvitele-Streptococcus pyogenes C 203 6,3 268 6
