189898. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 1,2,3-triazino [4',5',4,5] tieno [2,3-b] kinolin 4(3h)-on-származék előállítására
5 189898 6 szükséges dózist az orvos választja meg, figyelembevéve a beteg korát és súlyát, a diagnózist, a betegség súlyosságát. A találmány szerinti vegyület antiallergiás aktivitása „IgE-hez kötött patkány passzív cutaneous anaphylaxis (PCA)” teszten mutatható be. Ez a vizsgálat az antiallergiás aktivitás kvalitatív meghatározására egyike a legjobb farmakológiai teszteknek. A dinátriura-kromoglicát ebben a vizsgálatban is aktívnak mutatkozik, míg orálisan adva aktivitást nem tapasztaltunk. A vizsgált módszert az alábbiakban ismertetjük. PCA-tesztmód8zer 1. ) Anti8zérum - az irodalom különböző standard módszereket ismertet az ovalbuminná reagáló antiszérum előállítására akár Hooded Lister, akár Brown Norway felnőtt patkányokban. 2. ) Állatok - a vizsgálatok során antiszérum-recipiensként felnőtt hím Sprague-Dawley vagy nőstény Wistar Kyoto patkányokat használunk. Az 5-14 napon keresztül etetve és vizet ad.Iib. kapva akklimatizálódtak. 3. ) Szenzibilizálás - a recipiens patkányokat 100 mikroliter hígított antiszérummal intradermális injekció formájában (egy-egy injekció a hát mindkét oldalába) szenzibilizáltuk. A szenzibilizálás 48-72 órával az antigén reakció előtt történt. 4. ) A vizsgálandó vegyületek adagolása - a te8ztvegyületet 4-6 állaton vizsgáltuk. A vegyületet megfelelő vivőanyagokban homogenizáltuk és az antigén reakció előtt 5 perccel (i.p.) intra peritoneálisan 60 mg/kg mennyiségben, vagy 240 perccel az antigén reakció előtt (p.o.) per os 100 mg/kg menynyiségben adagoltuk. 5. ) Antigén reakció és a reakció értékelése - ovalbumin (0,1-1,0 mg 0,5%-os Evan's Blue színezék oldatban) fiziológiás oldatát intravénásán adtuk patkányoknak. 30 perc elteltével a PCA reakciók eredményét mértük oly módon, hogy az adott bőrfelületen az átlagátmérót és szinintenzitást mértük. A tesztvegyület aktivitását a kontroll reakcióhoz viszonyított gátlás százalékában fejeztük ki. A fentiek szerinti vizsgálatot elvégezve, a találmány szerinti vegyület mind intra peritoneálisan, mind orálisan aktívnak bizonyult, így például intra peritoneálisan 60 mg/kg hatóanyag alkalmazásával 100 %-os gátlás érhető el. A fentiekben leírt PCA teszten mutatott aktivitáson túlmenően a találmány szerinti vegyület gátolja a hisztamin leadást patkányokon passzív peritoneális anafilaxis (PPA) teszten mérve. A módszert az alábbiakban ismertetjük. PPA-tesztmódszer 1. ) Antiszérum - az ovalbuminná reagáló antitestet felnőtt hím B»DjFi egereken készítettük. 2. ) Kísérleti állatok - felnőtt hím Sprague Dawley vagy nőstény Wistar Kyoto patkányokat használtunk antitest-recipiensként. A kísérleti állatok 5-14 napon keresztül etettük, vizet ad.Iib. adva akklimalizáltuk. 3. ) Szenzibilizálás - a recipiens patkányokat meghatározott egér antí-ovalbumin-antiszérumot tartalmazó, megfelelően hígított, 2 ml térfogatú fiziológiás sóoldattal szenzibilizáltuk. A szenzibilizálást az antigén reakció előtt 2 órával végeztük. 4. ) A teszt-vegyület adagolása - a vizsgálandó vegyületre 5-10 kísérleti állatot használtunk. A vegyületet ekvivalens menynyiségű nátrium-bikarbonáttal fiziológiás sóoldatban homogenizáltuk (a nátrium-bikarbonátot az oldékonység növelése céljából adagoltuk) és az antigén reakció előtt 30 másodperccel 60 pg mennyiségben intraperitoneálisan, vagy az antigén reakció előtt 5- -60 perccel per os adtuk. 5. ) Antigén reakció és a vizsgálatok értékelése - 2 mg ovalbumin 5 ml módosított Tyrode oldatát i.p. injekció formájában adtuk és 5 perc elteltével a kísérleti állatokat megöltük. A peritoneális shock folyadékot összegyűjtöttük és centrifugálással osztályoztuk. A fehérjéket perklórsavas kicsapással és azt követő centrifugálással távolitottuk el a mintákból. A mintákat ezután automatikusan fluorometriás vizsgálattal hisztamintartalomra vizsgáltuk. A kezelt állatok peritoneális shock folyadékának hisztaminszintjét a kontroll állatok shock folyadékának hisztaminszintjével hasonlítottuk össze. A gyógyszerhatás eredményességét a hisztaminleadás gátlásának százalékában fejezzük ki. Találmányunkat az alábbi példákban mutatjuk be, anélkül azonban, hogy igényünket azokra korlátoznánk. 1. példa 50 g 2-klór-6,7-dimeloxi-3-kinolin-karboxaldehidhez 50 g hidroxilamin-hidroklorid 500 ml piridinben elkészített oldatát adjuk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 16 órán keresztül keverjük és az oldószert ellavolítva fél-szilárd anyagot kapunk. A kapott anyagot vízzel mossuk, szűrés és dimetil-formamidból történő álkristályosítás után 2- -klór-6,7-dimetoxi-3-kinolin-karboxaldehid-oximol kapunk. Olvadáspont: 237-237,5 °C (bomlik). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
