189869. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aktaplanin-származékok előállítására
1 2 189.869 atomnál kapcsolódik a fenotos csoporthoz, a mannóz és a ramnóz pejdg a glükózhoz kapcsolódik. Amikor R, jelentése glükóz (aktapianin 0), az ugyancsak az 1-es szénatomnál kapcsolódik. Ahol az R2 és R3 jelenetése mannóz, az szintén az 1-es szénatomnál kapcsolódik a fcnolos hidroxilcsoporthoz. A találmányban szeteplő aktaplanin-származékok hasonlóan az ismert aktaplanin-származékokhoz vízben és poláris szerves oldószerekben oldódnak. Megfeleld savakkal, például sósavval, kénsavval, foszforsavval és salétromsavval sókat képeznek. Ezek a sók az antibiotikumok gyógyászati szempontból alkalmazható formái, és a beadásra széni készítmények elkészítésénél felhasználhatók. A sók a szokásos sóképző eljárásokkal elkészíthetők, például úgy, hogy a vegyidet vizes oldatát savval reagáltatjuk, és a keletkezett sót antiszolvens adásával lecsapjuk. Amikor a találmány aktaplanin-származékait a kérődzők takarmányhasznosításának a javítására használjuk, az egyes faklorokat, vagy ezek keverékét adjuk az állatok takarmányához vagy ivóvizébe. Az antibiotikumok lehetnek szabad bázis formájában, vagy - előnyösen - alkalmazhatjuk só, például hidroklorid, formájában őket. Állati táplálékban alkalmazva, az aktaplanínok lehetnek alkalmas prernix formájában. A Gram-pozitív mikroorganizmusokkal, például Staphylococcusszal vagy Streptococcussza! fertőzött állatok kezelésekor beadhatunk egyedi antibiotikumot vagy az antibiotikumok bármelyen keverékét. Példa Az, aktaplanin-származékok hidrolizését az alábbiak szerint végezzük. Az aktapianin 0,5 mg/ml koncentrációjú vizes oldatát 2,5 n vizes sósavval pl 1=1,80-1,85 kémhatására savanyítjuk. Az oldatot gőzfürdőben melegítjük (az oldathőmérséklete 90 °C). Két és félórás melegítés után mintát veszünk, és HPLC-vel analizáljuk. A hidrolízátum anyagainak analízisét és detektálását egy Model 660 eluens programozóval, két Mode! 6000 oldószerszállító rendszerrel, Model 440 fényelnyelős detektorral, Model U6K jnjektorral és m-Bondapak Cj j-oszloppal (300x3,9 mm) ellátott fotyadékkromatográffal (Waters Associates, Milford, Massachusetts, USA) végeztük. HPLC mozgófázis: A oldószer = 2%-os vizes ecetsav acetonitril (90:10 térf. egység), B oldószer = 2%-os vizes ecetsav/acetonitril (70:30 térfogat egység). Áramlási sebesség: 0,8 ml percenként. Nyomás 850 psi. Detektor: 0,02 Áufs., UV, 254 nm. Eluens programozó beállítása: 0- 100% B oldószer, 7 görbe, 30 perc. A III. táblázatban felsoroljuk a találmányban szereplő aktaplanin-származékok retenciós faktorát, K’. 1 J1L-táblázat. ■ Az aktaplanin-származékok retenciós faktorai aktapianin K’érték D-1 K L M N O 7,12 7.37 1,93 2.38 3,59 3.98 4.98 5 1C 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 A 111. táblázat K értékeit módosítottuk, hogy öszszehasonlíthassuk a 4 322 406 számú USA szabadalmi leírásban közölt aktapianin A, Bt, Ba, C j , C3 és E» értékeivel, illetve az aktapianin G értékével. Az összehasonlítás érdekében végzett módosításokra azért van szükség, mert az említett szabadalmi leírásban közölt K értékek kissé eltérő HPLC körülmények között lettek felvéve, mint amilyeneket itt alkalmaztunk. A K’ értékek megadása és összehasonlítása csak akkor következetes, ha a kapott értékeket azonos HPLC körülmények között határozzuk meg, vagy nagyon hasonló retencióidejű vegyietekhez viszonyítjuk őket. A tiszta aktaplanin-származékok fent leírt részleges hidrolízisének eredményeként a hidrolízátum keverékében a kiindulási anyagot és a hidrolízis termékeket találjuk. Az aktapianin K, L, M, N és O termékek retenciós ideje csak kissé hosszabb a kiindulási aktaplanin-származékok retenciós idejénél. A kiindulási anyag HPLC csúcsát ezért viszonyítási jelként használhatjuk a hidrolizátumban levő ismert aktapianin és az új aktaplaninok K' értékei közötti különbségek meghatározásánál. Ezeket a különbségeket, a WK érlékeket, minden esetben megkaptuk a kiindulási anyag és az új akjaplanin-származékok csúcsainak elválásából. A WK értékeket ezután hozzáadtuk az ismert aktapianin előzőleg megállapított és közölt K értekeihez és így az alábbi eredményeket kaptuk aktapianin K WK aktapianin K A 1,60 0.33 K 1,93 B1 1,99 0,39 L 2,38 üi 2,50 1,09 M 3,59 Cj g 2,92 1,06 N 3,98 G1 4,42 0,56 O 4,98 Szabadalmi igénypont Eljárás az (I) általános képletű — ahol R jelentése L-risztózamin-o-csoport R, jelentése hidrogénatom, glükozilcsoport vagy mannozil-glükozil- vagy ramnozii-glükozilcsoport, R2 és R3 jelentése egymástól függetlenül hidrogéna tóm vagy mannozil-csoport, azzal a feltétellel, hogy ha Rí jelentése hidrogénatom, az R2 és R3 egyikének vagy mindkettőjének jelentése mannozil-csoport, ha Rí jelentése glükozilcsoport, az R2 és R3 jelentése egyaránt hidrogénatom, és ha Rj jelentése mannozilglükozil-vagy ramnozil-glükozil-csoport, R2 jelentése hidrogénatom — aktaplanin-származékok előállítására, azzal jellemezve, hogy aktapianin A, Bj, B2, B3, Cj ,C3 cvagy G faktort ásványi sav pH = 1,5- 2,0 kémhatasú vizes oldatával hidrolizálunk 80-100 °C hőmérsékleten és kívánt esetben a kapott elegyből elválasztjuk a tiszta aktaplanin-származékokat, 2 db rajz 4
