189757. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiai tulajdonságú peptidek előállítására
1 189.757 2 12,72 g (93%) cím szerinti vegyületet kapunk. Rf: 0,63 (kloroform-metanol-víz 70:30:5 arányú futtatóelegy, szilikagél réteg). 3. Z-Pro-Arg(Mbs)OtBu előállítása 12,72 g (31,76jnmól) H-Arg(Mbs>OtBu és 7,92 g (31,76 mmól) Z-Pro-OH elegyéhez —5 “C-on egymás után 5,15 g(38,11 mmól)N-hidroxi-benztriazolt és 7,23 g (34,94 mmól) didklohexil-karbodiimidet adunk. A reakcióelegyet -5 °C-on 15 percen át, 0 “Con 45 percen át, majd egy éjszakán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. A diciklohexil-karbamidot leszűrjük és az oldatot bepároljuk. Az olajos maradékot 500 ml etil-acetátban oldjuk és az oldatot 3-szor 100 ml 5%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel extraháljuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk, majd bepároljuk. A kapott olajos maradékot metanolban oldjuk. Víz hozzáadására olajszerű terméket kapunk. 16,75 g (88,9%) cím szerinti vegyületet kapunk. Rf: 0,40 (toluol-etanol 82 arányú futtatóelegy, szilikagél réteg). 4. Z-Pro-Arg(Mbs>OHelőállítása 15 g (23,74 mmól) Z-Pro-Arg(Mbs)-OtBu-t 150 ml 90%-os trifluor-ecetsav és 15 ml anizol elegyében oldunk, és az elegyet 1 órán át keverjük. A reakcióelegyet 1500 ml éterbe öntjük, ekkor olajos anyag válik ki. A felülúszót dekantáljuk és az olajat éterrel keverjük. Az étert dekantáljuk. Az olajat 100 ml diklór-metánban oldjuk, majd éterbe csepegtetjük. A kivált csapadékot leszűjrük és kálium-hidroxid felett szárítjuk. I25I 8 (91,5%) cím szerinti vegyületet kapunk. Rf: 0,46 (diklór-metár.-metanol-víz 70:305 arányú futtatóelegy, szilikagél réteg). 5. Z-PrO-Arg(Mbs)-Gly-NH2 előállítása 254 g (22514 mmól) H-Gly-NHj HC1 25 ml dime til-formamiddal készült oldatához — melyhez 2,89 ml (22,94 mmól) N-etil-morfolint adunk - 12 g (2035 mmól) Z-Pro-Arg(Mbs)-OH és 5,64 g (41,70 mmól) N-hidroxi-benztriazol 180 ml dimetil-formamiddal készült elegyét adjuk —10 °C-on 4 órán át, majd egy éjszakán át 4 °C-on keverjük. A diciklohexil-karbamidot leszűrjük és a szűrletet bepároljuk. A kapott olajos maradékot 200 ml 2-butanol-diklór - -metán 2:3 arányú elegyben oldjuk és 3-szor 50 ml 5%-os kálium-hidrogén-szulfátoldattal, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és 30%-os nátrium-klőrid-oldattal extraháljuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szül fát felett szárítjuk A szerves fázist petroléter hozzáadásával kicsapjuk, a csapadékot szűrjük és petroléterrel mossuk. 12,42 g(943%) cím szerinti vegyületet kapunk. Rf: 0 ,77 (kloroform-metanol-víz 70:30:5 arányú futtatóelegy, szilikagél réteg). 0. Trt-Cys(Trt)-Pro-Arg(TSlbs)-Gly-NH2 előállítása 1,75 g (2,77 mmól) Z-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2-t 50 ml dimetil-formamidban 175 mg 5% fémtartalmú szénhordozós palládium katalizátor jelenlétében hidrogéngázzal hidrogénezünk. A katalizátort leszűrjük és az elegyet —10 °C-ra hűtjük, majd hozzáadunk egymás után 1,35 g (2,71 mmól) Trt-Cys(Trt)-OH-t, 0,70 g (5,16 mmól) N-hidroxi-benztriazolt és 0,59 g didklohexil-karbodiimidet. A reakdóelegyet —10 °C- on 15 percen át, 0 °C-on 1 órán át, majd szobahőmérsékleten egy éjszakán át keverjük. Az elegyet -25 °C-ra hűtjük, a kicsapódott diciklohexilkarbamidot leszűrjük és a szűrletet bepároljuk. Olajos maradékot kapunk, melyet 50 ml 2-butanol-diklór-metán 2:3 arányú elegyben oldunk, majd 3-szor 15 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, 5%-os kálium-hidrogén szulfát-oldattal és 30%-os nátrium-klorid-oldattal extrahálunk. A szerves fázist vízmentes nátirum-szulfát felett szárijuk, majd bepároljuk. 2,70 g (96%) cím szerinti vegyületet kapunk. Rf: 0,82 (kloroform-metanol-víz 70:305 arányú futtatóelegy,szilikagél réteg). 7. H-Cys(Trt>Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2 előállítása 6,85 g (6,31 mmól) Trt-Cys(Trt)-Pro-Arg(Mbs)--Gly-NH2 -t 40 ml ecetsavban oldunk, az oldathoz lassan 4 ml vizet adunk. Az oldatot szobahőmérsékleten további 1 órán át keverjük, majd újabb 40 ml vizet adunk az oldathoz. A kivált csapadékot leszűrjük, a szűrletet be pároljuk. A kapott olajos maradékot 70 ml 2-butanol-diklór-metán 23 arányú elegyben oldjuk, maid 3-szor 10 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karb on át oldattal, és 3-szor 10 ml 30%-os nátrium-kloridoldattal extraháljuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az éter hozzáadására kivált csapadékot leszűrjük és szárítjuk. 5,08 g (89%) cím szerinti vegyületet kapunk. Rf: 0,71 (kloroform-metanol-víz 70305 arányú futtatóelegy, szilikagél réteg). 8. Z431y-Asn-€ys(Trt)-Pro-Arg(MbsyGly-NHï előállítása 3,42 g (4,06 mmól) 7. lépésben kapott peptid és 1,60 g (4,06 mmól) Z-Gln-Asn-OH 50 ml dimetil-formamiddal készült oldatához -10 “Con egymás után 0,66 g (437 mmól) N-hidroxi-benztriazolt és 035 g (4,10 mmól) diáklohexil-karbodiimidet adunk. A reakcióelegyet 24 órán át keverjük, majd —25 °C-ra hűtjük és a kivált diciklohexil-karbamidot leszűrjük. A szűrletet 100 ml 5%-os n átrium -hi drogén - -karbonátoldatba öntjük. A kivált csapadékot leszűrjük, és vízzel háromszor mossuk, majd szárítjuk. 4.0 g (803%) cím szerinti vegyületet kapunk. Rf: 0,70 (kloroform-metanol-víz 70:305 arányú futtatóelegy,szilikagél réteg). 9. Z-Gln-Asn-Cys(Scm)-Pro-Arg-Gly-NH2 előállítása 4.0 g (3,23 mmól) 8. lépésben kapott peptideí 100 ml metanol és 100 ml diklór-metán elegyében oldunk. Hozzáadunk 0,6ml S-karboxi-metil-szulfenilkloridot. A reakcióelegyet 1 órán át keverjük, majd a kivált csapadékot leszűrjük és éterrel mossuk. 2.00 g (57%) cím szerinti vegyületet kapunk. Rf: O55 (diklór-metán-metanol-víz 70:305 arányú futtatóelegy,szilikagél réteg). 10. Z-GÍn-Asn-Cys-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2 HC1 elő állítása H- Cys-OH 2.00 g (1 34 mmól) 9. lépésben kapott pepiidet 100 ml metanolban oldunk, majd hozzáadunk 0,65 g (3,68 mmól) H-Cys-OHHClH20-t. Az elegyet 1 órán át keverjük, majd 100 ml éter hozzáadásával kicsapjuk a peptidet. A folyadékot dekantáljuk és a kristályokat éterrel kétszer elkeverjük. A maradékot kis mennyiségű metanolban oldjuk és kromatográfiás eljárással tisztítjuk. 650 mg (31,3%) cím szerinti vegyületet kapunk. Rf: 0,31 (butanol-etil-acetát-víz 67:1023 arányú futtatóelegy, szilikagél réteg). 5 10 15 20 25 3C 35 40 45 50 55 60 4
