189709. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 9-(2-hidroxi-etoxi-metil)-guanin-észter-származékainak előállítására
t 189 709 2 (65%) 9-(2-glicil-oxi-etoxi-metil)-guanin-hidroklorid, olvadáspontja 148-150°C. IR (KBr) 3200 - 2350 (NH3+), 1750 (COOR) cm'1 - ». UV (0,1 n HC1) 253 ran (e 8,53 x 10*), 275 (sh), NMR (60 MHz, DMS0-d6/D20) 5 3,85 (s, 2H, N-CHj-CO), 4,25 (m, 4H, CH2CH2), 5,5 (s, 2H, O-CHj -N), 8,3 (s, 1H,8H), TLC Rf 0,29 (EtOH-HOAc, 8 :2), Elemanalízis CjoH^N^O». HC1 összegképlet alapján: számított: C = 37,69%, H = 4,74%, N = 2687%, talált: C = 37,84%, H = 4,64%, N = 26,25%. 2. példa 9-(2-0-a-Alanil-oxi-etoxí-metil)-guanin-hidroklorid előállítása /(I) általános képletű vegyület, R 4 jelentése -CHCH<CH3)NH2 . HC1) a) 0,99 g (4 mmól) 9-{2-hidroxi-etoxi-metil)-guanin-1,026 g (4,3 mmól) N-benzil-oxi-karbonil-a-alanin (Aldrich), 0,04 g vízmentes p-toluol-szulfonsav és 1,755 g (5,6 mmól) N,N-diciklohexil-karbo-diimid keverékét 80 ml vízmentes piridinben 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd hozzáadunk 1 ml ecetsavat és a keverést további egy órán át folytatjuk. Ezután a keveréket leszűrjük, a csapadékot meleg metanollal alaposan átmossuk, a szürletet a mosófolyadékkal egyesítjük, szárazra pároljuk és a maradékot 50 g szilikagél töltetű oszlopon kromatografáljuk, az eluálást kloroform: metanol 9 : 1 arányú elegyével végezve. Metanolos átkristályosítás után 1,15 g (67%) védett a-alanln-észtert nyerünk /(I) általános képletű vegyület, R3 jelentése -COCH-(CHsjNHCOOCHíCjsHs csoport), olvadáspontja 145 -147°C. UV (MeOH) V ov 255 mm (e 9,87 x 10*), 270 f t \ ITlaA (sh), Vékonyréteg kromatográfia: R,0,40 (CHCI3 -MeOH, 8 :2) bj 0,662 g (1,54 mmól) a) pont szerint előállított védett a-alanin-észtert 3,1 ml 0,5 n sósavval és 200 ml víz-metanol eleggyel (1:1 térfogatarány) elkeverünk és 2 órán át 2,758 bar hidrogénnyomáson 0,3 g szénhordozós 10%-os palládium-katalizátor jelenlétében hidrogénezünk. Ezután a katalizátort leszűrjük és vízzel átmossuk. A szürletet a mosóvízzel egyesítjük és vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot víz-metanol elegyből átkristályosítjuk, ily módon 0,354 g (71%) 9<2-0-a-alanin-oxi-etoxi-metil)-guanin-hidrokloridot nyerünk, olvadáspontja 153-155°C. UV (0,1 n HCl) ÏL^ 254 nm (e 1,10 x 104), 273 (sh), NMR (100 MHz, DMSO-d«) 1,36, (d, 3H, CH3( J = 8 Hz), 3,72 (m, 2H, COOCHj-CTU-O), 4,04 (q, 1H, CH, J = 8 Hz), 4,26 (m, 2H, COOCH2), 5,3 (s, 2H 0-CHj-N), 6,74 (s, 2H, £NH2), 7,84 (s, 1H, 8-H), 8,56 (széles jel, 3H, -NHJ ), 10,9 (brs, 1H, 1-NH), Vékonyréteg kromatográfia: Rf 0,23 (EtOH-HOAc, 8 :2),. Elemanalízis a CuHi604N6 alapján: HC1 összegképlet 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 számított: O 39,69%, H = 5,15 %, N = 25,36%, talált: C = 39,52%, H = 5,06%, N- 25,18%. 3. példa 9-(2-O-0-Alanil-oxi-etoxi-metil)-guanin-hidroklorid előállítása /(I) általános képletű vegyület, R3 = -COCH2CH2- -NH2-. HC. csoport) a) A 2a) példa szerinti eljárást követjük, csak kiindulási anyagként 0,99 g (4 mmól) 9^2-hidroxi-etoxi-metil)-guanint és 1,026 g (4,3 mmól) N-benzil-oxi-karbonil-0-alanint (Aldrich) alkalmazunk. A kapott terméket metanolból átkristályosítva 1,24 g (72%) védett (3-alanin-észtert nyerünk, olvadáspontja 147-148°C. UV 254 nm (e 9,91 x 103) MeOH) 270 (sh), NMR WMHz, piridin-d.) 8 2,65 (t, 2H -CH2-COO, J = 6 Hz); 3,65 (m, 4H, N-CH2-CH2 és COOCH2 -CH2-0), 4,20 (m, 2H, COOOH2-), 5,20 (s, 2H, 0-CH2-N), 5,50 (s, 2H, PhCH2-0), 7,3 (m, 5H, fenil), 8,1 (s, 1H,8H), TLC Rr 0,41 (CHCla-MeOH, 8,2). c) 0,99 g (2,3 mmól) a) lépés szerint előállított védett 0-alanin -észtert a 2 b) lépésnél leírtak szerint ekvivalens mennyiségű sósav jelenlétében hidrogénezünk. A termék kinyerését a 2 b) eljárás szerint végezve, 0,59 g (77%) 9-(2-0-ß-alanil-oxi-etoxi-metil)-guanin-hidrokloridot nyerünk, olvadáspontja 202 204°C. UV (0,1 n HC1) X^ 2,54 nm (e 1,09 x 104>, 273 (sh), NMR (100 MHz, DMSO-d--) 8 2,69 (m, 2H, -CHr -COO), 3,01, (m, 2H, NTH.CH.), 3,71 (m, 2H, COOCH.-CH.-O), 4,15 (in, 2H, COOCH-.), 3,71 (nt, 2H, COOCH.-CH.-O), 4,15 (m, 2H, COOCHr), 5,38 (s, 2H7 0-CHrN), 6,71 (s, 2H, 2-NH.),V,84 (s, 1H, 8-H), 8,0r(brs, 3H, -NH.+), lO^brs, 1H, 1-NH), Vékonyréteg kromatográfia: Rr0,23 (EtOH-HOAc, 8 :2), Elemanalízis a Cj jHj^O^N^ . HG összegképlet alapján: ' w számított: C = 39,69%, H = 5,15%, N = 25,36%, . talált: C = 39,79%, H = 5,23%, N = 25,21%. A) példa Szemcsepp-készitmény előállítása összetétel: 1,00 g 1,2 vagy 3. példa szerinti hatóanyag 1,52 g bórsav 0,0008 g borax 0,01 g benzalkonium-klorid 100 ml desztillált víz A megadott mennyiségű anyagokat a vízben feloldjuk, az izotóniás pufferoldat pH-ja 5,7. Biológiai hatás vizsgálata a) Vírusölő képesség in vitro A vizsgálatok során az 1-3. példák szerint előállított vegyületek különböző vírusokkal szemben kifejtett hatását vizsgáltuk, összehasonlító anyagként acyclovirt alkalmaztunk. A vizsgálatok primer nyúlvese sejt-tenyészetében végeztük. 4
