189625. lajstromszámú szabadalom • Eljárás OMT és DMT 23-monoészterek előállítására
1 2 A találmány tárgya javított eljárás 5-0-mikaminozll-tilonolid (OMT) és demicinozil-tilozin (DMT) 23-monoészter származékainak előállítására, azzal jellemezve, hogy az OMT vagy DMT észterezését alacsony és szobahőmérséklet közötti hőfokon megfelelő acilező ágenssel, az OMT-hez vagy DMT-hez hozzáadagolt, bázis jelenlétében hajtjuk végre úgy, hogy a 23-hidroxil-csoport acilezése gyakorlatilag teljes legyen. Az alkalmazott bázis előnyösen piridin vagy 2,4,-6-kollidin. Az OMT 23-monoészter származéka az (I) általános képletű vegyület, ahol R jelentése 1-4 szénatomos alkanolil-, fenil-(l —4 szénatomos)-alkanoil- vagy difenil-foszforil-csoport. A DMT 23-monoésztere a (II) általános képletű vegyület, ahol R jelentése a fenti. A korábbi eljárások szerint az OMT 2’,4’,23-tri-O-acil-, illetve a DMT 2’,23-di-O-acil-származékait kellett első lépésben előállítani, majd a második lépésben az OMT 2’ és 4’ a DMT 2’ helyzetű acilcsoportját el kellett távolítani, hogy az OMT, illetv^ a DMT 23-monoészter-származékát előállítsák. A Kokai Tokhyo Koko JP 82.05.000. szerint a 23-monoészter-származékot 3,2 3,2’,4’-tetra-0--acetil-mikaminozil-tilonolidon keresztül, piridines közegben, szintén több lépésben állítják elő. A találmány szerinti eljárással közvetlen módon, szelektíven acilezhető az OMT, illetve DMT 23-helyzetű hidroxilcsoportja, és így a kívánt 23-monoészter származék közvetlenül állítható elő. Az OMT, illetve a DMT 23-monoészter származékai antibiotikumként, illetve/vagy antibiotikum közbenső termékként használhatók fel. A találmány tárgya eljárás az OMT és DMT 23- -monoészter származékainak közvetlenül OMT-ből, illetve DMT-bői történő előállítására. Az eljárás során az OMT-t, illetve DMT-t bázis, mint például piridin vagy 2,4,6-kollidin, jelenlétében acilezőszerrel, így valamely 1 -4 szénatomos alkánkarbonsawal, fenil-(l—4 szénatomos)-alkánkarbonsawal vagy difenil-foszforsawal vagy annak reakcióképes savszármazékával acilezzük, amíg a 23-helyzetű hidroxilcsoport acilezése gyakorlatilag teljesen végbemegy. Az OMT előállítását Marvin Gorman és Robert B. Morin 3.459.853. számú 1969. augusztus 5-én bejelentett Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírása szerinti eljárással végeztük. A DMT előállítását Richard H. Baltz, Gene M. Wild és Eugene T. Seno „Demicinozil-tilozin előállítási eljárása” cimű, 42250 Al EPO közzétételi számú szabadalmi bejelentésének eljárása szerint végeztük. Az OMT előnyös előállítási eljárását írták le DMT enyhe savas körülmények között végzett hidrolízise segítségével Baltz és munkatársai a 42250 A1 EPO közzétételi számú eljárásukban. A találmány tárgya eljárás az OMT és DMT közvetlen 23-helyzetű hidroxilcsoporton történő acilezésre, azzal jellemezve, hogy az acilezést a megfelelően kiválasztott acilezőszerrel, bázis, mint például piridin, 2,4,64collidin, jelenlétében végezzük, amíg a 23- -helyzetű hidroxilcsoport acilezése teljesen befejeződik. Az acilezés végbemenetelének fokát vékonyrétegkro/natográfia segítségével ellenőrizzük. Amennyiben szükséges, további acilezőszert adunk a reakcióelcgyhez, amíg a 23-hidroxilcsoport acilezése teljessé nem válik. Bázis jelenléte nélkül az OMT 2’- és 4’-helyzetű hidroxilcsoportjának, illetve a DMT 2’helyzetű hidroxilcsoportjának acilezése könnyebben végbemegy, mint a 23-helyzetű hidroxilcsoporté. Az OMT, illetve DMT 23-monoészter származékának korábbi előállítási módszere szerint első lépésként az OMT 2’, 4’-diacil származékát, illetve a DMT 2’-0-acil származékát állították elő, második lépésként a 23-hidroxilcsport észterezését végezték el ezeken a vegy(Heteken, harmadik lépésként pedig eltávolították a 2’, 4’helyzetű vagy 2’-helyzetű acilcsoporto(ka)t és így a megfelelő 23-monoészter származékhoz jutottak. A fentiek értelmében mind az OMT, mind pedig a DMT esetében három reakcióból álló eljárást kellett alkalmazni a 23-monoészter előállításához. A találmány szerinti eljárás javított módszer, amellyel a 23-monoészter származékokat közvetlenül lehet előállítani. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott tipikus acilezőszerek a megfelelő szerves savak anlüdridjei, savhalogenidjei és reaktív észterei. Az acilezési reakció során alkalmazott reakcióhőmérséklet az acilező ágens reaktivitásával fordított arányban változik. Reaktív acilezőszerekkel, mint például savkloridokkal, a reakció alacsony hőmérsékleten, körülbelül -80 °C és 0 °C közötti hőmérsékleten hajtható végre. Az ilyen reakcióban előnyösen alkalmazható hőmérséklet körülbelül —78 °C. Amennyiben kevésbé reaktív savanhidrideket vagy reaktív észtereket alkalmazunk reaktánsként, a reakciót magasabb hőmérsékleten, —20 °C és szobahőmérséklet között hajtjuk végre. A találmány szerinti eljárás alapvető jellemzője, hogy az acilezést bázis jelenlétében hajtjuk végre. Az eljárásban alkalmazható bázisok a tercier aminok, mint például a piridin és a 2,4,6-kollidin. Amennyiben elegendő mennyiségű bázist alkalmazunk, az OMT és DMT 3’-helyzetében található dimetilaminocsopojrtjának irányító hatása kiküszöbölhető. A találmány szerinti eljárással védett acilezési reakciót addig folytatjuk, amíg a 23-helyzetű hidroxilcsoport acilezése nem teljes. Mint ez ismert a reakcióidő aszerint változik, hogy milyen reakciókörülményeket alkalmaztunk, különösen-, hogy az acilező ágens milyen reaktivitású és a reakcióhőmérséklet milyen érték. A kívánt OMT és DMT 23-monoészter származékok elválasztása és tisztítása az irodalomból ismert módszerek szerint történik. Az OMT és DMT 23- -monoésztereinek tisztítására különösen előnyös a szilikagélen végzett kromatográfiás elválasztás. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákon részletesen ismertetjük. 1. Előállítás A) A DMT rázóedényben végzett fermentációja A Streptomyces fradiae NRRL 12170 liofilizált labdacsát 1-2 ml sterilizált vízben diszpergáljuk. Ennek az oldatnak 0,5 ml-ét használjuk fel az alábbi összetételű táptalaj (150 ml) beoltásához. Alkotórész Mennyiség (%) Kukorica páclé 1,0 Élesztő extraktum 0,5 Szójabab por 0,5 189.625 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
