189610. lajstromszámú szabadalom • Eljárás maltoheptaoz-származékok előállítására
1 189.610 2 A találmány tárgya eljárás olyan maltoheptaóz-számiazékok előállítására, amelyek a-amiláz meghatározására használhatók. Közelebbről a találmány az I általános képletű maltoheptaóz-származékok előállítására vonatkozik, amelyeknek a képletében R fenil-glükozid., (mononítro-feníl>glükozid-, (dinitro-fenlI>glükozid-, szorbít- vagy glükonsavcsoportot jelent. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy a) olyan 1 általános képletű vegyületek előállítása céljából, amelyeknek a képletében R fenil-glükozid-, (mononitro-fenil)-glükozid- vagy (dinitro-fenil)-glükozid-csoportot jelent, peracetilezett maltoheptaózt valamilyen Friedel-Crafts katalizátor jelenlétében fenollal, nitro-fenollal vagy dinitro-fenolíal reagáltatimk, vagy a megfelelő fenil-glükozidot, illetve nitrált fenil-glükozidot Bacillus macerans-amíláz jelenlétében a-ciklodextrinnel, amilázzal vagy oldható keményítővel reagáltatjuk. b) olyan 1 általános képletű vegyületek előállítása céljából, amelyeknek a képletében R (nitro-fenil)-glükozíd-csoportot jelent, egy olyan I általános képletű maltoheptaóz-származékot, amelynek a képletében R fenil-glükozid-csoportot jelent, nitrdlósavval nitráiimk, c) olyan I általános képletű vegyidet előállítása céljából, amelynek a képletében R szór bitcsoportot jelent, maltoheptaózt nátríum-bórhidriddel redukálunk, d) olyan I általános képletű vegyidet előállítása céljából, amelynek a képletében R glükonsavcsoportot jelent, maltoheptaózt brómmal oxidálunk. A peracetilezett maltoheptaóznak Friedel-Crafts katalizátor jelenlétében végzett reagáltatását előnyösen összeolvasztással vagy valamilyen apoláros oldószerben, visszafolyató hűtő alatti forralással végezzük, Friedel-Crafts katalizátorként cink(II)-kloridot, ón(IV)-kloridot vagy títán(IV)-kloridot használva. A fenol, illetve nilro-fenol bevitele után a védőcsoportokat önmagában ismert módon lehasítjuk, például nátrium-metiláttal, ammónium-hidroxiddal, kálíum- Jüdroxiddal vagy báríum-mctanoláttal metanolos oldatban, vizes báriuin-hidroxid-oldattal stb. Ez a módszer magára a fenolra, valamint mononitro- és dinitro-fenolra is megfelelő. Hasonlóképpen az is lehetséges, hogy előbb a fenil-származékot állítsuk elő, és ezt végül nitráljuk, például a Bull. Chem. Soc. Japan, 34., 718 (1961) alatt leírt eljárással. Ez a módszer különösen a monitro-származék előállítására alkalmas, mert ilyen körülmények között a keletkezett o- és p-nitro-fenil-származékok jól elválaszthatók. A fenil-származék enzimatikus előállítása a fenil-gjükozid, illetve a megfelelő nitrált fenil-glükozid a-ciklodextrinnel, amilázzal vagy oldható keményítővel, valamilyen specifikus mikrobiális transzferáz jelenlétében végzett transzglükozilezésével történik. Erre a célra előnyösen Bacillus maceransból származó transzferázt használunk. Ezenkívül erre a transzglükozilezésre a Bacillus maceransból számlázó ismert amiláz [E.C. 2,4,1.19. DSM 24; amely a J.A.de Pinto és L.L. Campbell által a Biochemistry, 7., 114-120., (1968) irodalmi helyen leírt módon állítható elő; transzferreakció: Methods in Carbohydr. Chemistry, Vol. II. 347] használható, amely hidrulitikus és ciklizáló hatás mellett nyilvánvalóan glükozil-transzferáló hatással rendelkezik. Az R helyén glükonsavcsoportot tartalmazó I általános képletű vegyidet oxidációval történő előállítását például a Methods in Carbohydr. Chemistry, II. kötet, 13. oldalán ismertetett módon valósíthatjuk meg. A kiindulási anyagként alkalmazott maltoheptaóz például a 2.741.191.2 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli szabadalmi bejelentésben leírt módon állítható elő. A találmány szerinti eljárással előállított I általános képletű vegyületek a-amiláz meghatározására szolgáló eljárásban használhatók szubsztrátumként. Az I általános képletű vegyületek előállítását az alábbi példákon mutatjuk be. 1. példa a-Fenil-maltoheptaozid előállítása a) Tridekozacetil-0-maltoheptaóz 57,6 g (50 mmól) maltoheptaózt és 41 g (500 nun ól) vízmentes nátrium-acetátot szuszpendálunk 543 ml (5,75 mól) ecetsavanhídridben, és nedvesség kizárása mellett 4 órán át 100 °C-on erősen kevertetjük. Körülbelül 60 °C-ra lehűtjük, majd keverés közben körülbelül 1 liter jeges vízbe öntjük, és éjszakán át 4 °C-on kevertetjük, mire nyúlós, félig kristályos massza válik ki. A felülúszó leöntése után a maradékot újra jeges vízzel kevertetjük. Ekkor a termék átkristályosodik. Szűrjük, mossuk és megszárítjuk. Ki termelés; 80,7 g (76%) színtelen, kristályos anyag. [a]^7obahőfok = - 137,5° (c= 1,5; kloroform). Olvadáspont 150 °C (nem éles). Az anyalúgot (a leöntött folyadékot) vákuumban szárazra pároljuk, és a maradékot szintén jeges vízzel keverjük, és kristályosodásra bírjuk. Kitenuelés; 22,3 g. [a]^oballo^ok = +136° (c= I; kloroform). Olvadáspont 150 °C. összkítermelés: 103 g (körülbelül 97%). A termék danáiból átkristályosítható, de többszöri átkristályosítás után sem változik az olvadáspont és a forgatás. A termék ennélfogva az 1-es szénatomon optikailag egységes (ß) konfigurációjú. b) DodekozacetiI-/3-fenil-D-maltoheptaozid 9,54 g (4,5 mmól) tridekozacetil-fi-D-maltoheptaózt, 0,61 g (4,5 mmól) frissen megolvasztott cink(II)-kloridot és 4,23 g (45 mmól) desztillált fenolt nedvesség kizárása közben 100 °C-on 2,5 órát keverte tünk. Utána még melegen etilacetátban feloldjuk, és 2x100 ml vízzel, 3x100 ml 1 n nátrium-hidroxid-oldattal, 100 ml 1 n ecetsav-oldattaJ és 100 ml telített nátrfum-klorid-oldattal mossuk. Magnézium -szulfáton való szárítás után szárazra pároljuk, és 30 ml meleg metanolban feloldjuk. Egy éjszakán át való állás után szirupszerű anyag válik ki, amelyet etanolból kristályosítunk. Kitermelés: 8,7 g (90%). Olvadáspont: 155-165 °C (bomlás). ja]Szobahőfok . + J470 (c- g- kloroform). c) Fenfl-ús-D-maltoheptaozid 10,8 g (5 mmól) peracetil-l-fenil-a-D-maltoheptaozidot melegen feloldunk 200 ml vízmentes metanolban. szobahőmérsékleten kevés dioxán hozzá5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
