189550. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a humán szérum-prealbumin N-terminális részével analóg szerkezetű, az immunológiai ellenállóképességet növelő hatású deka-, undeka-, dodeka- és tridekapeptidek előállítására
1 189 550 2 H-Giy-Pro'Thr-D-Ala-Thr-Gly-Glu-Ser-Lys-Cys—OH op.: 153 °C; [aß5= -40,4° (c= 1,0, ecetsav). H-Gly-Pro-Thr-D-Leu-Thr-Gly-Glu-Ser-Lys-Çys—OH op.: 162 °C; [a]o = -36,7° (c = 0,4, ecetsav). H-Gly-Thz-Thr-Gly-Thr-Gly-Glu-Ser-Lys-Cys—OH op.: 133-140 °C; [a]2D5= -48,7° (c = 0,9, ecetsav). H-Gly-Pro-Thr-Gly-Thr-Gly-Glu-Ser-Lys-Cys- Pro-Leu—OH [a]“= -75,6° (c = 0,9, ecetsav). H-Gly-Pro-Thr-GIy-Thr-Gly-GIu-Ser-Lys- Cys(Me)-Pro-Leu— OH op. : 182 °C; [a]o= -76,7° (c = 0,9, ecetsav). H-Gly-Pro-Thr-Gly-Thr-Gly-Glu-Ser-Lys- Cys(Me)-Pro—OH op.: 187 °C; [aß5 = -70,9° (c = 0,9, ecetsav). H-Gly-Pro-Thr-Gly-Thr-Gly-Glu-Ser-Lys-Cys- Pro-Leu-Met—OH op.: 178 °C; [aß5 = -77,0° (c = 0,8, ecetsav). H-Gly-Pro-Thr-Gly-Thr-Gly-GIu-Ser-Lys- Gys(Me)-Pro-Leu-Met—OH op.: 170-173 °C; [aß5 = -77,0° (c = 0,8, ecetsav). Megjegyzés: a fenti felsorolásban szereplő peptideknél megadott valamennyi olvadáspontnál a peptid bomlása következik be. A fenti 1-3. példában leírt peptidek a példák szerinti eljárással általában 60%-ot meghaladó hozammal állíthatók elő. 4. példa Savaddíciós só előállítása a szabad peptidből 50 mg H-Gly-Pro-Thr-Gly-Thr-Gly-Glu-Ser- Lys-Ala—OH szabad bázis oldatához (vő.: 5. példa) 30 ml n ecetsavoldatot adunk. A kapott oldatot liofilizáljuk és így a fenti peptid ecetsavas sóját kapjuk, körülbelül 50 mg mennyiségben; op.: 184 °C. A fent leírthoz hasonló módon állítjuk elő a találmány szerinti eljárással kapott peptidek egyéb savaddíciós sói, például a sósavval, hidrogénbromiddal, kénsavval, foszforsawal vagy salétromsavval képezett savaddíciós sók, ha a fenti eljárásban ecetsav helyett (a peptidre számítva sztöchiometrikusan elvivalens mennyiségben) az említett egyéb savakat alkalmazuk. 5. példa Só átalakítása szabad peptiddé 50 mg H-Gly-Pro-Thr-Gly-Thr-Gly-Glu-Ser- Lys-Ala-ecetsav-só 50 ml vízzel készített oldatát egy 50 g Dowex 1 erősen bázisos, kvaterner ammonium anioncserélő gyantát tartalmazó oszlopon vezetjük keresztül; az oszlopot előzőleg nátriumhidroxid-oldattal hozzuk egyensúlyba hidroxid-ion képzése céljából. Az oszlopot azután 150 ml vízzel eluáljuk és a kapott eluátumot liofilizáljuk. Ily módon körülbelül 48 mg mennyiségben kapjuk a fenti dekapeptidet szabad bázis alakjában; a termék aminosav-analízis adatai és optikai forgatóképessége megegyezik a 3. példában megadottal. Hasonló módon alakítjuk át a találmány szerinti peptidek egyéb sóit - például az előző példában említett sókat - a megfelelő szabad bázisokká. 6. példa Gyógyszerkészítmények Az alábbi példában megadott összetételű gyógyszerkészítményekben H-Gly-Pro-Thr-Gly-Thr- Gly-Gln-Ser-Lys-Ala-NH2 szerepel hatóanyagként. A találmány körébe tartozó egyéb peptidek azonban ugyanilyen módon alkalmazhatók az alábbi ismertetett gyógyszerkészítmények hatóanyagaiként. A) Hatóanyag 1,0 mg nátrium-klorid 0,0 mg injekció céljaira alkalmas víz 9,5 1,0 ml. B) Hatóanyag 1,0 mg nátrium-dihidrogénfoszfát- 5,4 mg hidrát dinátrium-hidrogénfoszfát 8,66 mg nátrium-klorid 2,52 mg injekció céljaira alkalmas víz 8,5 1,0 ml. C) Hatóanyag 1,0 mg mannit 100 mg injekció céljaira alkalmas víz 8,5 1,0 ml D) Hatóanyag 1,0 mg nátrium-dihidrogénfoszfát- 5,4 mg hidrát dinátrium-hidrogénfoszfát 8,66 mg mannit 25 mg injekció céljaira alkalmas víz 8,5 1,0 ml. Az összes szilárd alkotórészeket vízben oldjuk és az oldatot egy steril üvegcsében liofilizáljuk. Beadás előtt a liofilizált készítményhez a szilárd anyagok feloldása céljából vizet adunk. Ha az üvegcse többszörös adagnak megfelelő készítmény-mennyiséget tartalmaz, akkor ajánlatos tartósítószert tartalmazó vizet alkalmazni; így például 1,2 mg/ml metil-parabent és 0,12 mg/ml propil-parabent tartalmazó vizet használhatunk erre a célra. Az ilyen tartósítószert tartalmazó oldattal készített hatóanyag-oldatot 4 °C hőmérsékleten két hétig terjedő ideig tárolhatók. 7. példa ln vitro rozetta-próba A vizsgálatot lényegileg a J. F. Bach és munkatársai [Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 68, 2734 (1974)] által leírt módon végezzük. A pontos vizsgálati eljárás a következő : A) Az azatioprin-nátriumsó törzsoldat előállítása 277 mg azatioprin szabad savat (Imuran, a Burroughs Wellcome cég készítménye) mérőlombikban feloldunk 25 ml vízben. A lombik tartalmáho/ cseppenként, keverés közben kb. 1 ml n nálrium-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
