189550. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a humán szérum-prealbumin N-terminális részével analóg szerkezetű, az immunológiai ellenállóképességet növelő hatású deka-, undeka-, dodeka- és tridekapeptidek előállítására

1

2

_ 189 550

A találmány tárgya eljárás az emlős állatok, különösen pedig az ember immunológiai ellenállóképességét növelő rövidláncú, 10, 11, 12 vagy 13 aminosavból felépülő új peptidek előállítására.

Ismeretes már számos olyan anyag, amely emlős 5 állatoknak beadva fokozza azok immun-rendszerének betegségek elleni védekezőképességét. Ezek között az anyagok között vannak nyers mikrobaktérium-kivonatok, glikopeptidek és ezek módosított származékai, továbbá „timozinok” ; ez utóbbiakon 10 a timusz-mirigy által kiválasztott hormonok egy osztályát értik. Újabban kimutatták, hogy egy vérfrakció, a humán szérum-prealbumin is mutat ilyen aktivitást (4 046 877 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás). 15

A humán szérum-prealbumin szerkezetét már sikerült egyértelműen tisztázni: ez az anyag oly alegységek tetramerje, amelyek mindegyike 127 aminosavat tartalmaz, ugyanazon ismert szekven- 2_ ciában [Y. Kanda és munkatársai: J. Biol. Chem.

249, 6976 (1974)], sőt meghatározták ennek az anyagnak a háromdimenziós konfigurációját is [C.

L. F. Blake: J. Mól. Bioi. 121 (3), 339 (1978)].

A jelen találmány szempontjából leglényegesebb szekvencia-rész az N-terminális vég-szekvencia, 5 amelyről kimutatták, hogy az alábbi szerkezetű:

Gly-Pro-Thr-Gly-Thr-Gly-Glu-Ser-Lys-Cys-Pro-Leu-Met 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

Az alegységek mindegyikének az N-terminálistól 30 kezdődő nonapeptid-fragmensét már 1971-ben leírták a prealbumin szerkezetének meghatározására irányuló korábbi kísérletek eredményeként [G. Gonzalez és munkatársai: Biochem. J. 125, 309 (1971)]. 35

Meglepő módon azt találtuk, hogy az emberi szérum-prealbumin alegységek N-terminális végszekvenciájának megfelelő deka-, undeka-, dodeka- és tridekapeptidek rendkívül nagy mértékben fokozzák az emlősök immunológiai ellenállóképes- 40 ségét. Emellett az említett peptidek szekvenciájának egy vagy több helyzetben más amino-acilcsoportoknak az eredetileg ott lévők helyére történő bevitele útján való módosításával olyan peptidekhez jutunk, amelyek hasonló vagy még fokozot- 45 tabb immunológiai ellenállásnövelő képességet mutatnak.

A jelen találmány szerint előállított peptidek az alábbi (I) általános képlettel jellemezhetők :

H-Glv-B-Thr-A'-Thr-A"-D'-Ser-Lys-X-Y (I) 50

I

R

ahol

A’ jelentése Gly, D-Ala vagy D-Leu, A" jelentése Gly vagy D-Ala, B jelentése Pro vagy Thz, D' jelen- 55 tése Glu vagy Gin, R jelentése hidrogénatom vagy rövidszénláncú alkilcsoport, mely utóbbi a lizilcsoport £-aminocsoportjának egyik hidrogénatomját helyettesíti, X jelentése Cys, Ala, ABU vagy Cys(Me), Y jelentése hidroxilcsoport, Pro—OH, Pro- 60 Leu—OH, Pro-Leu-Met—OH vagy —NH2, azzal a megszorítással, hogy ha Y jelentése más mint hidroxil- vagy amincsoport, akkor B jelentése Pro,

A’ és A" jelentése Gly, D'jelentése Glu és X jelentése Alá, Cys vagy Cys(Me); a találmány körébe 65

tartozik továbbá a fenti peptidek gyógyászati szempontból elfogadható sóinak előállítása is.

(A fentiekben és e leírás további részében szereplő rövidítéseket és azok használati módját az alábbiakban részletesen megmagyarázzuk.)

Közelebbről megjelölve, a fenti meghatározásnak megfelelő (I) általános képletű peptidek körébe az alábbi (IIfl), (ÍM), (Il2) és (Il3) általános képleteknek megfelelő deka-, undeka-, dodeka- és tridekapeptidek tartoznak:

H-Gly-B-Thr-A’-Thr-A"-D'-Ser-Lys-X- OH (!,„)

I

R

H-Gly-B-Thr-A'-Thr-A’-D’-Scr-Lys-X-Pro- OH (1,,)

I

R

H-Gly-B-Thr-A’-Thr-A" D‘-Scr-Lys-X-Pro-Lcu - OH ([,,)

I

R

H-GIy-B-Thr-A‘-Thr-A"-D'-Ser-Lys-X-Pro-Leu-Mct—OH

I

R

U„>

- ahol A’, A", B, D’, R és X jelentése megegyezik a fenti meghatározás szerintivel - és az (Il0) általános képletü dekapeptidek amidjai, valamint a fenti általános képleteknek megfelelő peptidek és azok gyógyászati szempontból elfogadható sói növelik az ember és az emlős állatok immunológiai ellenállóképességét, így a találmány körébe tartozik a fenti általános képleteknek megfelelő dekapeptideket, dekapeptidamidokat, undeka-, dodeka- vagy tridekapeptideket és/vagy azok gyógyászati szempontból elfogadható sóit hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítása is.

Ebben a leírásban a szöveg egyszerűsítése és áttekinthetőségének növelése érdekében a peptidkémiában általában elfogadott konvencionális rövidítéseket alkalmazzuk [a IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature által ajánlott rövidítésekre vonatkozólag vö.: Biochemistry, 11, 1726 (1972)]; az egyes aminosavak ilyen rövidítései - amennyiben más kifejezetten megadva nincs - L- aminosavakat jelentenek, természetesen az aszimmetrikus szénatomot nem tartalmazó glicin és más akirális aminosavak kivételével. Valamennyi peptid-szekvencia az általánosan elfogadott konvenció szerint oly módon van írva, hogy a szekvencia baloldali kezdő aminosava az N-terminális aminosav, a jobb oldalon utolsóként a C-terminális aminosav áll.

A fenti konvencionális rövidítéseken kívül e leírásban még az alábbi további rövidítéseket alkalmazzuk különböző amino-acil-csoportok megjelölésére :

Amino-acil-csoport Rövidítés

tiazolidin-2-karbonsav Thz

S-metil-L-cisztein Cys(Me)

a-amino-vajsav ABU

Amint fentebb már említettük, valamennyi amino-acil-csoport fenti rövidítése az L-enantiomerre vonatkozik, amennyiben másképpen megjelölve nincs.

E leírásban „rövidszénláncú alkilcsoport” alatt egyenes vagy elágazó szénláncú, 1-4 szénatomos telített szénhidrogén-csoport, például metil-, etil-,

~>