189512. lajstromszámú szabadalom • Eljárás makrolid antibiotikumok előállítására
1 .189 512 2 X. Táblázat A DMT akut toxicitása Adagolás módja LDS0 (mg/kg) Hímek Nőstények p.o. — 5000 s.c.-5447 i.v. 100 186 i.p. 721 325 Abban az esetben, ha melegvérű állatok betegségét kezeljük, úgy a találmány szerinti vegyületeket állatorvosi készítmények alakjában adagoljuk. A találmány tárgya egyrészről eljárás állatorvosi készítmény előállítására, amely készítmény aktív összetevőként egy (I) általános képletü vegyületet, vagy ennek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sóját vagy észterét tartalmazza, legalább egy, semleges vivőanyaggal együtt. A témában jártas szakemberek előtt nyilvánvaló, hogy ezen készítményekben használt vivőanyagok természete hasonló lehet a tilozin esetében használt vivőanyagokhoz. A találmány szerinti eljárást a továbbiakban példákkal szemléltetjük. 1. példa A) A DMT előállítása a rázott lombikban kivitelezett fermentációval A Streptomyces fradiae NRRL 12 170 liofilezett tenyészetét 1-2 ml steril vízbe szuszpendáljuk. 0,5 ml szuszpenzióval 150 ml alábbi összetételű vegetativ táptalajt oltunk: kukoricalekvár 1,0 % élesztő kivonat 0,5 % szójabab dara 0,5 % kalcium-karbonát 0,3 % szójabab olaj (nyers) 0,45% ionmentes víz 97,25% Eljárhatunk oly módon is, hogy az S. fradiae NRRL 12 170 vegetativ tenyészetének 1 ml-ét, amelyet előzőleg folyékony nitrogénben tároltunk, felolvasztunk, és ezzel oltjuk a vegetatív táptalajt. A beoltott vegetatív táptalajt 500 ml térfogatú Erlenmeyer-lombikokban tenyésztjük 29 “C hőmérsékleten, 48 órán át, percenként 300-at forduló, zárt rázógépben. A kinőtt vegetatív táptalaj 0,5 ml-ével 7 ml alábbi összetételű termelő táptalajt oltunk : répamelasz 2,0 % kukoricaliszt 1,5 % halliszt 0,9 % kukoricadara 0,9 % nátrium-klorid 0,5 % diammónium-hidrogén-foszfát 0,04% kalcium-karbonát 0,2 % szójabab olaj (nyers) 3,0 % ionmentes víz 91,36% A beoltott fermentációs táptalajt 50 ml térfogatú lombikokban tenyésztjük 29 *C hőmérsékleten, 6 napon át, percenként 300-at forduló, zárt rázógépben. B) A DMT előállítása tankfermentorban ' Nagy térfogatú inokulum előállítására az A) pontban megadottak szerint 1200 ml kinőtt vegetatív táptalajjal 4300 liter második fázisú vegetatív táptalajt oltunk, amelynek összetétele a következő: kukoricalekvár 1,0 % szójaliszt 0,5 % élesztő kivonat 0,5 % kalcium-karbonát 0,3 % szójabab olaj (nyers) 0,5 % lecitin (nyers) 0,015% víz 97,185% A táptalaj pH-ját 50%-os nátrium-hidroxidoldattal 8,5-re állítjuk be. Ezt a második fázisú vegetatív tenyészetet 1500 liter térfogatú fermentorban inkubáljuk 48 órán át 28 °C hőmérsékleten, levegőztetés és keverés közben. Körülbelül 700 liter második fázisú tenyészettel 4300 liter térfogatú steril, termelő táptalajt oltunk, aminek az alábbi az összetétele: halliszt 0,875% kukoricaliszt 1,5 % kukoricadara 0,875% kalcium-karbonát 0,2 % nátrium-klorid 0,5 % diammónium-hidrogén-foszfát 0,04 % répamelasz 2,0 % szójaolaj (nyers) 3,0 % lecitin 0,09 % víz 91,32 % A táptalaj pH-ját 50%-os nátrium-hidroxidoldattal 7,2-re állítjuk be. A beoltott termelő táptalajt 9000 liter térfogatú fermentorban tenyésztjük 8-9 napon át, 28 ’C hőmérsékleten. A fermentációs táptalajba steril levegőt vezetünk át olyan mennyiségben, hogy az oldott oxigén koncentrációja 30% és 50% között legyen, a táptalajt továbbá percenként 250-et forduló, hagyományos keverővei keverjük. 2. példa A DMT izolálása Az 1. példában megadottak szerint előállított 3800 1 teljes fermentlevet szűrjük, szűrési segédanyagjelenlétében. Vízzel mossuk a micéliumot, és a vizes mosófolyadékot hozzáadjuk a szűrlethez. 50%-os, vizes nátrium-hidroxid-oldat 9,5 l-ével 9,2-re állítjuk be a szűrlet pH-ját, ezután 2000 1 etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos extraktumhoz 450 1 ionmentes vizet és 6,4 kg nátriumhidrogén-foszfátot adunk, a kapott elegyet erőteljesen keverjük. Az oldat pH-ját 3300 ml, 33%-os foszforsav-oldattal 6,0-ról 4,35-re állítjuk be. A vizes fázist elkülönítjük. Az elkülönített vizes fázis pH-ját 700 ml 50%-os, vizes nátrium-hidroxidoldattal 6,5-re állítjuk be. Az így kapott oldatot csökkentett nyomáson 225 1 térfogatra töményítjük. A sűrítmény pH-ját 16 1 10%-os, vizes, nátrium-hidroxid-oldattal 9,2-re állítjuk be. A kapott lúgos oldatot egy éjszakán át állni hagyjuk. Az oldatból kivált kristályokat szűréssel elkülönítjük, 50 1 ionmentes vízzel mossuk, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
