189402. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-imino-pirrolidinek és savaddíciós sóik valamint hatóanyagként a fenti vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 . 189 402 2 I. táblázat (folytatás) Vegyüld (példa Akut toxieitás száma) só formában Dózis (mg/kg) Alkalmazás módja Pusztulás (X) 21 22 A** 33 200 33 200 200 200 i. p. p. O. 1. p. p. O. 1. p. p. O. 20 0 40 0 60 0 A**: összehasonlító vegyület: l-metil-2-[(3,4-dimetoxi-fenetil)imino]-pirrolidín Vérlemezke-aggregációt gátló hatás Kollagénnel indukált vérlemezke-aggregáció A vérmintát nyúl nyaki verőeréből vesszük, antikoagulánsként 9 térfogat vérhez 1 térfogat 3,8%-os nátrium-citrát-oldatot használunk. A vérlemezkében dús plazmát (PRP) alacsony fordulatszámú (1200 fordulat/perc, 10 perc) centrifugálással nyerjük, míg a vérlemezke-szegény plazmát (PPP) magasabb fordulatszámú (4500 fordulat/perc, 15 perc) centrifugálással választjuk el. A PRP mintákat az aggregométer kamrájába visszük, és 37 °C-on inkubáljuk, majd 0,04 ml, vizsgálandó vegyületet tartalmazó Michaelis-puffert, és ezután 0,08 ml aggregálószert (előzőleg 33 °C-on 90 másodpercen át inkubált kollagén-szuszpenziót) adunk hozzá. A vérlemezke-aggregációt a PRP optikai sűrűségének csökkenése jelzi (a PRP kiindulási optikai sűrűsége 100%, a PPP-é 0%). A kapott eredményeket a II. táblázatban adjuk meg. II. táblázat Vegyüld (példa száma) só formában Kollagén-indukálta vérlemezke-aggregáció Küszöb-koncentráció (üg/ml) (aggregációgátlás <50%) Erősen gátló koncentráció (pg/ml) (aggregációgátlás >50%) 1. 100 2. 10 30-100 3. 1-3 10-100 4. 10-30 100 5. 3-10 30-100 6. 1-3 10-100 7. 10 30-100 8. 10-30 100 9. 3-10 30-100 10. 100 11. 10-100 12. 3-30 100 13. 3-30 100 14. 3-10 30-100 16. 10-30 100 17. 3 10-100 18. 10-30 100 19. 3-10 30-100 20. 10-30 100 21. 3 10-100 22. 30 100 A inaktív Fibrinolitikus hatás A vérlemezke-aggregációt gátló hatáson kívül a vegyületek egy része fibrinolitikus hatással is rendelkezik, melyet a kővetkezők szerint mutatunk ki. A humán plazmarögöt rekalcifikációval nyerjük oly módon, hogy 0,5 ml plazmához egy csepp 20 egység/ml koncentrációjú kalcium-trombázt adunk, a rögöt egy üvegrúd kampója körül alakítjuk ki. A rögöt ezután veronál pufferoldatban (pH 7,2-7,4) szuszpendáljuk és 37 °C-on inkubáljuk. A lízis bekövetkeztét 24 óra és 48 óra inkubálás után állapítjuk meg. A kapott eredményeket a III. táblázatban közöljük. III. táblázat Vegyület (példa A rög lízisét kiváltó koncentráció (mmól/1) száma) só formában 24 órán belül 48 órán belül 1. 10-20 2. 20 3. 10-20 6. 5-10 7. 10-20 8. 20 13. 10 2,5-5 18. 20 21. 10-20 22. 20 5-10 Anti-aritmiás hatás Patkányokkal végzett akonitin vizsgálat Az állatokat 1 g/kg i. p. adott uretánnal altatjuk, majd 27,5 pg/kg dózisban akonitin-szulfátot tartalmazó injekciót adunk az előzőleg katéterrel ellátott nyaki vénába, 30 perc múltán ugyanilyen módon a vizsgálandó vegyülettel kezeljük az állatot. Elektrokardiogramon meghatározzuk azt az időtartamot, ami az első aritmiás jel megjelenéséig eltelik (D2 elvezetésű EKG), és összehasonlítjuk a kezeletlen állaton mért idővel. Az eredményeket a IV. táblázatban adjuk meg. IV. táblázat Akonitin-indukált aritmia száma) só formában dózis (mg/kg) védett állatok %-a 1. 1 25 2. 1 67 3. 10 83 4. 7,5 90 13. 5 50 14. 5 100 15. 5 80 16. 3 80 17. 10 100 18. 5 100 19. 2,5 25 20. 10 100 21. 7,5 100 A 5 0 I i 5 10 .5 20 25 30 35 40 45 50 55 60 8
