189394. lajstromszámú szabadalom • Eljárás megtermékenyítésre alkalmas ivartermékek előállítására ivarérett halakból
1 2 víztelenítik 3 x 8-12 órányi acetonos áztatás után a hipofízis vízmentessé és zsírmentessé válik. A megkeményedett hipofízis golyókat szobahőmérsékleten 24 óráig szárítják, az aceton ezalatt kipárolog belőlük. Az aceton nem károsítja a hipofízis gonadotrop hatóanyagait, és az ilyen szárított hipofízis golyók hosszú ideig eltarthat ók hatóanyagcsökkenés nélkül. A hipofízis gonadotrop hormonjainak mobilizálására a hipofízis golyókat dörzscsészében szétdörzsölik és halfiziológiás (0,65%-os NaCl) oldatban feloldják. A hipofízis oldatot a szaporításra szánt halak izomszövetébe fecskendezik úgy, hogy veszteség, visszafogás ne következzék be. A laza izomzatú vagy apró halaknál az oldatot a hasüregbe injektálják. Az exogén hipofízis hormon ilyenkor úgy szerepel, mint az ívási környezet észlelésekor felszabadított saját hipofízis hormon: megindítja és kiváltja az ovulációt. A haltenyésztésben széleskörűen alkalmazott hipofizálási eljárás nem minden esetben sikeres. Ennek főbb okai a következők: a) Nem lehet tudni, hogy az adott hipofízis mirigyek milyen ivari állapotú halakból származtak, így ismeretlen a bennük lévő gonadotrop hormon menynyisége is. Ezért a tág határok közötti adagolás is csak vizonytálán eredményt ad. b) A ponty hipofízisének hormonjai csak magára a pontyra és a hozzá genetikailag közel álló halfajokra hatásosak. Ezért több, gazdaságilag jelentős halfaj egyáltalán nem vagy csak alacsony hatékonysággal szaporítható. c) Pontyhipofízissel vagy egyáltalán hipofízissel üzemi körülmények között kizárólag LH hatást értek ei, nem valósítható meg vele FSH hatás, valószínűleg az a) pontban jelzett okok miatt. d) Az FSH hatás hiánya miatt a hipofizálást kizárólag az ovulációra érett petéjü halak indukciójára lehet használni. e) Az indukált mesterséges szaporítás lehetősége az egyébként is természetes ívás idejére korlátozódik, ami évente csupán néhány nap. Ez a termelő kapacitások korlátozott kihasználásával jár együtt. f) A hipofízis-gyűjtés nagy mennyiségekben kizárólag nem ivarérett halakból oldható meg, amelyeknek mirigye csekély gonadotrop aktivitású. Az ivarérett halakból való hipofízis-gyűjtés a potenciálisan nagy értékű és kis egyedszámú anyahalak elpusztításával járna együtt. A találmány célja olyan eljárás kidolgozása, amely lehetővé teszi, hogy bármilyen halból természetes vagy mesterséges megtermékenyítésre alkalmas érett ivarterméket kapjunk. A találmány alapja az a felismerés, hogy a fenti cél maradéktalanul elérhető, ha az ivarérett hal szervezetébe új gonadoliberin-származékokat juttatunk. Felismertük ugyanis, hogy a halak hipotalamuszában szecernált FSH-LH/RH eredményesen helyettesíthető ezekkel a vegyületekkel, vagyis ilyen vegyilletek injektálásával eredményesen indukálhatunk sperma- és petefejlődést, valamint ovulációt. Fentiek alapján a találmány eljárás megtermékenyítésre alkalmas ivartermék előállítására ivarérett halakból, a hal természetes ívási időpontjától függeteln időpontban, ahol az ivarérett hal biológiai érettségét az ivartermék (spermium vagy ikra) vizsgálata alapján megállapítjuk, az ovulációra nem érett halakat elkülönítjük az ovulációid érett halaktól, a halakba hormonhatású vegyületet fecskendezünk,majd ac ovuláció lezajlása után az ivarterméket a halból vagy annak környezetéből kinyerjük. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy a halakba hormonhatású vegyületként 0,1 /rg-5-mg, előnyösen 2-500 fjg, célszerűen 5-100 ng mennyiségű (I) általános képleté G1 -His-Trp-Ser-Tyr-X i -X3 -Xj-Proof,» - amely képletben Xj jelentése glicil-csoport vagy bármilyen természetes vagy szintetikus D-aminosav-csoport, X2 jelnetése olyan L-aminosav-csoport, amelynek oldallánca Cj^-alkü-m fenil- vagy indolil-csoport, X3 jelentése olyan L-aminosav-csoport, amelynek oldallánca Cj^-akil-csoport vagy (^^alkanoik-amid-csoport, és X4 jelentése olicil-amid- vagy Cj4alkil-a mid-csoport nonapeptid^-Ci^alkilamidot, illetőleg dekapeptid-amidot, valamint évegyidetek sóit vagy fémkomplexét juttatjuk be, és ovulációra nem érett halak esetén a fenti mennyiséget legalább 2 és legfeljebb 12 részletben adagoljuk, ahol utolsó adagként az előző adaggal legalább azonos nagyságú, előnyösen annál legalább 1,5-szőr nagyobb adagot alkalmazunk. A képletben alkalmazott rövidítések megegyeznek a peptidkémiában elfogadott nomenklatúrával, amelyet például a J, Biol. Chem. ismertet (241, 527 /1966/, 247, 977 /1972/). A vegyidet nem toxikus, így túladagolása nem okoz semmiféle káros hatást. Ovulációra nem érett halak kezelése esetén a befecskendezések száma attól függ, hogy a hal milyen messze van az ovulációra érettség állapotától. Ez az állapot minél közelebb van, annál kisebb a befecskendezések szánta. A hal ovulációra érett, ha teljes (hím) hal esetén a spermium vízzel érintkezve azonnal aktivizálódik, illetve ha ikrás (nőstény) hal esetén a petesejt sejtmagja a peteburok közvetlen közelében helyezkedik el. Az (I) általános képletű vegyületek közül különösen előnyösen használhatjuk a találmány szerinti eljárásban a (11) képletű Glp-His-Trp-Tyr-D-Phe-Leu-Gln-ího-Gly-NHj és a (III) képletű Glp-His-Trp-Ser-Tyr-D-Phe-Trp-Leu-Pro-Gly-NHj dekapeptidet. A találmány szerinti eljárásban felhasznált (1) képletű vegyületeket célszerűen a szilárd fázisú peptidszin tézis általánosan alkalmazott módszereivel (Merrifield, R.B., J. Am. Chem. Soc. 85, 2149-2151 /1963/) célszerű előállítani. A kívánt vegyület szerkezetétől függően peptid-alküamíd esetén klór-metdezett polisztirol-divinil-benzol gyantából, peptid-savamid esetén pedig benzhidrílamin gyantából célszerű kiindulni. Az egyes aminosavakat lépésenként kapcsolhatjuk a gyantához N-p-butil-oxi-karbonil (Boc) származékai formájában diciklo-hexd-karbodiimid (DCC), illetőleg diizopropil-karbodümid (DIC) segítségével vagy aktív észteres kapcsolással. Kívánt esetben a végterméket savas vagy lúgos hasítással lehet eltávolítani a szdárd hordozóról. Az előállítani kívánt vegyületben a változó aminosavrészek kémiai jellegétől függően a lépésenként! és a fragmens kondenzáció megfelel# kombinációt alkalmazva is felépíthetjük a kívánt mértékben védett aminosavakból az (I) általános képletű vegyületeket. A találmány szerinti eljárás főbb előnyei a következők: 3 Í80 394 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
