189286. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sejt- és szövetregeneráló anyagok előállítására
1 189 286 2 oldat hozzáadásával semlegesítjük. A semlegesített hidrolizátumot 1,66 ml 0,2 mólos 8,0pH-jú nátrium-borát-pufferrel pufferoljuk és választótölcsérben 2,0 ml dietil-éterrel 5 percen át extraháljuk. Az alsó fázist elöntjük és a felső éteres réteget vízfürdőn 37 *C-on szárítjuk. A száraz anyagot 3 ml kloroformban [amely 0,0025% fluoreszcamint - 4-fenil-spiro-[furan-2(3H)-r-ftalán]-3,3'-diont - (M. Naoi, J. C. Lee és S. Rosman, Anal. Biochem. 58 (1974), 571-577) - tartalmaz] felvesszük és 30 percen át keverjük. Az oldat fluoreszcenciáját 385 nm gerjesztő hullámhossz és 480 nm emissziós hullámhossz mellett mérjük. 7. példa Vágóhídon nyert borjúvért a vágás helyén azonnal 20%-os koncentráció eléréséig etanollal kezelünk és 0,02-0,02% koncentrációban bakteriosztatikus szerként p-hidroxi-benzoesav-metil-észtert (Metilparaben) és p-hidroxi-benzoesav-n-propilésztert (Propilparaben) adunk hozzá. A vért 3 napon át szobahőmérsékleten dializájuk. A művelet során egyidejűleg a vér autolízise is lejátszódik és a keletkező autolízis-termékeket dializáló membránon keresztül folyamatosan átdiffúndáltatjuk. A mindenkori optimális koncentráció-viszonyok fenntartása céljából a dializáló eljárást és az ezzel együtt lejátszódó autolízist ellenáramban végezzük. A kapott ellen-dializátum szárazanyag tartalma 5-80 mg/ml és 1 mg/ml értékig tartalmaz sebgyógyulást elősegítő anyagokat. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás a glikolipid-sorba tartozó, sejt- és szövetregeneráló anyagoknak emlősök véréből történő előállítására, amely anyagok az alábbi jellemző tulajdonságokkal rendelkeznek :- Ráérték = 0,65 (kovasavgél-lemezen, kloroform/metanol/0,l%-os vizes kalcium-klorid-oldat 55 :45 : 10 arányú elegyében, felszálló, jódgőzzel láthatóvá téve);- az alábbi színreakciók : 1.20 mg krezil-ibolya 1000 ml 1%-os ecetsavban: kékes-ibolya színeződés; 2. 1% difenil-amin 2 ml etanol, 100 ml tömény 5 sósav és 80 ml ecetsav elegyében : vörös színeződés ; 3. előbb 5,25% hipoklórossavat 40 ml benzol és 5 ml ecetsav elegyében a lemezre permetezünk, 60°C-on szárítószekrényben szárítjuk, majd 1% benzidin 50%-os etanollal képezett oldatával kezel-10 jük: kék színeződés; 4. 0,1 g orcinol 1 ml 1%-os vas(III)klorid-o!dat és 50 ml víz elegyében: barna színeződés;- vizes oldatból - 15 °C és - 25 °C közötti hőmérsékleten legalább 60 térfogat % - előnyösen 90 15 térfogat% - etanol-koncentráció eléréséig történő etanol-hozzáadás hatására kiválás, azzal jellemezve, hogy a vért több óra és néhány nap közötti időtartamon át, 4 °C és szobahőmérséklet között hőmérsékleten, vizes, 10-30 térfogat% metanolt 20 vagy etanolt tartalmazó közegben ugyanezzel a közeggel szemben 10 000 kizárás határú membránon keresztül autolízisnek és dialízisnek vetjük alá, és kívánt esetben az így nyert dializátumokat további tisztításnak vetjük alá. 25 - 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az autolízist és dialízist egyidejűleg és folyamatosan, ellenáramú eljárásban végezzük el. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy további tisztítás céljából a kapott 30 dializátumhoz etanolt adunk, a képződő etanolos oldatot - 15 °C és - 25 °C közötti hőmérsékleten állni hagyjuk és a glikolipideket kicsapjuk és elválasztjuk. 4. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal 35 jellemezve, hogy további tisztítás céljából a kapott dializátumot valamely, vízzel nem vagy csak korlátozottan elegyedő éter, szénhidrogén, halogénezett szénhidrogén, alkohol, karbonsavészter vagy ezek elegye hozzáadásával szilárd/folyékony vagy folyé-40 kony/folyékony fázisokra szétválasztjuk, a glikolipideket a szilárd fázisba, illetve a kevésbe poláros szerves fázisba átvisszük, a glikolipideket tartalmazó fázist elválasztjuk és a szerves fázist adott esetben kíméletes körülmények között szárítjuk. 45 I oldal rajz Kiadja az Országos Találmányi Hivatal A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető Szedte a Nyomdaipari Fényszedö Üzem (877835/09) 88-1603 — Dabasi Nyomda, Budapest — Dabas Felelős vezető: Bálint Csaba igazgató 7
