189077. lajstromszámú szabadalom • Eljárás izolált szervek, gyógyszerhatás által kiváltott kontrakciós reakcióinak in vitro vizsgálatára és több mérőhelyes elrendezés az eljárás foganatosítására
1 189 077 2 A találmány eljárás izolált szervek gyógyszerhatás által kiváltott kontrakciós reakcióinak in vitro vizsgálatára és több mérőhelyes elrendezés az eljárás foganatosítására. A gyógyszerkutatásban igen sok in vitro vizsgálatot végeznek különböző gyógyszerhatóanyagok hatásának vizsgálata és mérése céljából. Ilyen vizsgálatok pl. az izomszövetet tartalmazó szervek, ill. szervdarabok összehúzódásának, kontrakciós erejének, szívizom esetén a spontán kontrakció frekvenciájának befolyásolására alkalmas hatóanyagok hatékonyságának mérésére szolgáló vizsgálatok. Ezeket a vizsgálatokat különböző szervekből kimetszett, fiziológiás oldatban életben tartott preparátumokon végzik. A preparátumokat pontosan meghatározott körülmények között (hőmérséklet, oldatkoncentráció, oxigéntartalom stb.) kell tartani. A vizsgált hatóanyagok hatásmódjukat tekintve lehetnek agonisták (amelyek biológiai választ, az adott esetben izomösszehúzódást váltanak ki), vagy antagonisták (amelyek önmagukban nem fejtenek ki aktivitást, de az agonisták hatását gátolják), vagy a kettő között átmenetet képező anyagok. A vizsgálat során az antagonista anyagot adagolhatják az agonista előtt vagy időben utána, vagy pl. agonista adagolása és ezt követően a szerv kimosása után, ami után újból agonista adagolása következhet. Az agonista adagolása több alkalommal, meghatározott időközönként vagy egyéb feltételektől függően történhet egyre növekvő koncentrációban, mert az egy-egy alkalommal adagolt agonista óidat az izolált szervet tartalmazó fiziológiás oldatot nem hígíthatja fel lényegesen, a szerv válaszai (kontrakciója) pedig az egymás után következő adagolásoknál mind nagyobb szerkoncentráció elérését teszik szükségessé; a koncentráció növekedése 6...7 nagyságrendet is elérhet. Az adagolás mértékét és a bekövetkező kontrakció- vagy frekvenciaváltozást az idő függvényében pontosan kell regisztrálni. Egy ilyen vizsgálat 2...4 óra időtartamú is lehet. Tekintettel arra, hogy az ilyen vizsgálatok mindig statisztikus jellegűek, azaz a reprodukálhatóság és értékelhetőség érdekében a vizsgálat azonos körülmények között nagyszámú preparátumon kell elvégezni, a vizsgálatok végrehajtása hagyományos, normális laboratóriumi módszerekkel igen sok munkaerőt igényel, költséges és hosszadalmas, továbbá különösen az előírt hatóanyagok pontos adagolásában sok szubjektív tévedés lehetséges, ami a vizsgálat eredményét megbízhatatlanná teszi. Ezért a találmány kidolgozásánál célul tűztük ki olyan eljárás, továbbá az eljárás foganatosítására olyan több mérőhelyes elrendezés kidolgozását, amellyel a vizsgálatot több izolált szerven egyidejűleg, igen kevés emberi munkaerő felhasználásával és a szubjektív tévedések maximális kizárásával hajthatjuk végre. A találmány alapgondolata az a felismerés, hogy alkalmasan kialakított, több izolált szerv egyidejű befogadására, a vizsgálati körülmények állandóságának biztosítására, a hatóanyagok pontos adagolására és a kontrakciós reakciók izolált szervenként külön-külön mérésére alkalmas mérőrendszer birtokában a kezelő személyzet által elvégzendő műveletek mennyiségileg és minőségileg nagymértékben redukálhatok és megfelelő központi, digitális működésű elektronikus elrendezés kialakítása esetén a vizsgálati eredmények regisztrálása és a gyógyszerkutatás igényeinek megfelelően feldolgozott formában történő kiadása, pl. kinyomtatása is könnyen megoldható. Ennek megfelelően a találmány eljárás izomszövetet tartalmazó izolált szervek gyógyszerhatás által kiváltott kontrakciós reakcióinak in vitro vizsgálatára, amelyben az izolált szerveket a vizsgálat céljára egy-egy fiziotágiás oldatot tartalmazó, fűtött vízfürdőbe bemerülő szervedénybe helyezzük. A találmány szerinti eljárás ismertetésénél a rajzokon alkalmazott hivatkozási jeleket használjuk. A találmány abban van, hogy az 51 izolált szerveknek a 15 szervedényekben történő elhelyezését megelőzően a 44 vízfürdőt a vizsgálathoz szükséges hőmérsékletre felfűtjük és a vizsgálat egész időtartama alatt ezen a hőmérsékleten tartjuk; a vizsgálathoz szükséges agonista és/vagy antagonista hatóanyagokból a vizsgálathoz szükséges különböző koncentrációjú oldatokat készítünk és azokat a szükséges mennyiségben legalább egy kalibrált adagoló 14 fecskendőbe töltjük és a 14 fecskendőket a 15 szervedény fölött elhelyezett 9 kosár 43 furataiba helyezzük, a minden egyes 15 szervedény előtt elhelyezett, ugyancsak a 44 vízfürdőbe bemerülő és a 15 szervedényekkel összekötött 19 hőcserélőkbe fiziológiás oldatot engedünk olyan mennyiségben, amely a 19 hőcserélők megtöltésére elegendő, de a 15 szervedényekbe nem jut be. Ezt követően megvárjuk, amíg a 19 hőcserélőkben lévő fiziológiás oldat átveszi a 44 vízfürdő hőmérsékletét és ezután mindegyik előkészített 51 izolált szerv egyik végét egy-egy 15 szervedény fenekén rögzítjük, másik végét cgy-cgy 22 crőmérő érzékelővel mechanikusan összekötjük. Ezután a fiziológiás oldatot a 19 hőcserélőkből a 15 szervedényekbe juttatjuk olyan mennyiségben, amely a 15 szervedényeknek előírt folyadékszintig való megtöltésére elegendő, másrészt olyan módon, hogy a 15 szervedényekbe juttatott fiziológiás oldatot a 19 hőcserélőkben friss fiziológiás oldattal pótoljuk. Ezt követően a 22 erőmérő érzékelőket kinullázzuk, majd a vizsgálati programnak megfelelően az első 14 fecskendőt az első 15 szervedény fölé beállítjuk és a 14 fecskendőből a programban meghatározott mennyiségű oldatot a 15 szervedénybe juttatjuk. Ezután ugyanígy járunk el sorrendben valamennyi 15 szervedénnyel. Az oldatnak a 15 szervedényekbe juttatásától kezdődően ellenőrizzük valamennyi 51 izolált szerv kontrakciós reakciójának időbeli lefolyását es a tranziens lezajlása után és/vagy a programban a következő hatóanyag-adagolásig előírt szünet eltelte után a program szerint következő 14 fecskendőt állítjuk az első 15 szervedény fölé és abból a programban meghatározott mennyiségű oldatot a 15 szervedénybe juttatjuk, azután ugyanígy járunk el sorrendben valamennyi 15 szervedénnyel. Ezt a műveletsort mindaddig ismételjük, amíg a program r 10 15 29 25 30 35 40 45 50 55 60 2
