188955. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 koenzimet termelő fermentlé előállítására
% 188 955 0,05 g kobalt-kloridot," 0,03 g 5,6-dimetil-benzimidazolt és 0,3 g nátrium-biszulfitot. . Az egyes komponensek beadagolása után a tápközeget alaposan összekeveijük, majd 30-32 °C- os csapvízzel 8000. ml-re egészítjük ki. Ezután a tápközeghez a városi szennyvíztisztító telep anaerob utórothasztójából frissen vett 2000 nil kirothasztott szennyvíziszapot adunk. Az elegyet . összekeveijük, az üvegfermentort gumilappal lefedjük és 32-34 °C-os termosztátba helyezzük. A továbbiakban — a homogenizálás után — naponta 50 ml mintát veszünk és 35 ml metanolt adunk a fermentorba, majd újabb 200 ml mintát veszünk, a fermentort gumilappal lezárjuk és azonos hőmérsékleten hét napon át folytatjuk az anaerob fermentálást. Az első hétnapos fermentálás után kapott férmentié az ún. 1. generáció. _____________ A metanol betáplálás előtt vett mintából meghatározzuk a fermentlé pH-értékét és a metanol koncentrációját. A metanol beadagolása után vett 200 ml fermentlevet 32—34 °C-ra termosztált gazométerbe helyezzük és megméijük a biogáz termelés sebességét. A gazométerbe helyezett mintát a következő metanol adag betáplálásánál visszaöntjük a fermentorba. A fermentálás hetedik napján ötszörös léptéknövelést hajtunk végre; egy 50 liter hasznos térfogatú fermentort 30 1 30—32 °C-os csapvízzel töltünk fel, ehhez adagoljuk fentiekkel azonos módon előkészített tápanyagokat: 175 ml metanolt, 500 ml hőkezelt kukoricalekvár oldatot (hidrolizátumát), vagy 750 ml hőkezelt kukoricamoslékot, 150 g ammónium-hidrogén-karbonátot, 5 g mágnézium-kloridot, 25 g kobalt-kloridot, 15 g 5,6-dimetil-benzimidazolt és 1,5 g nátrium-biszulfitot. A tápanyagok beadagolása után a tápközeget 30—32 °C-os csapvízzel 40 1-re egészítjük ki. Ezután a hétnapos fermentlé ( 1. generáció) teljes mennyiségét (10 1) a frissen készített tápközeghez adjuk (átoltjuk) és intenzív homogenizálás után a fermentort lezárjuk, majd 32—34 °C. os hőmérsékleten további hét napon át anaerob módon fermentálunk. A második hét napon is minden nap 50 ml mintát veszünk és 175 ml metanolt adunk a fermentorba, majd újabb 200 ml mintát veszünk. A fermentort lezárjuk és 32—34 °C-on folytatjuk a fermentálást. A metanol betáplálás előtt, illetve után vett mintából pH-érték-, metanol-koncentrá-j ció, illetve biogáztermelés sebességmeghatározást végzünk. A második hétnapos fermentálás után kapott fermentlé az ún. 2. generáció. ,A 2. generációból homogenizálás után a fer-6 I í mentié 10%-át (5,0 1) elvesszük és helyébe azonos térfogatú tápközeget adunk. A tápközeg összetétele az alábbi: 5000 ml 30—32 °C hőmérsékletű csapvíz, 5 50 ml hőkezelt kukoricalekvár oldat, vagy 100 ml hőkezelt kukoricamoslék, 250 ml metanol, 15 g ammónium-hidrogén-karbonát, 0,5 g magnézium-klorid, 10 0,25 g kobalt-klorid, 0,15 g 5,6-dimetil-benzimidazol és 0,10 g nátrium-biszulfit. A tápközeg hozzáadása után a fermentlevet alaposan összekeveijük, a fermentort lezáijuk és 15 egy napig 32—34 °C-on fermentálunk. A fentiekben leírt eljárás során kialakult az új, anaerob, mezofíl, metántermelő vegyes mikropopuláció, amelynek törzseit az Országos Közegészségügyi Intézetnél a 00076; 00079 és 00272 szám 20 alatt deponáltunk. [Az egyes törzsek neve és jelzése a felsorolás sorrendjében: Corynebacterium sp. (jelzése 24 A 1); Propionibacterium sp. (jelzése 239 Aj/6) és Metanococcus sp. (jelzése MC— 017)]. 25 Az inokulum jellemző értékei: 5,4-5,8 pH érték és 0,5—0,8 1 biogáz/nap/1 fermentlé. A továbbiakban az inokulum már alkalmas a félfolyamatos B H koenzim termelésre. A félfolyamatos üzemelés első napján vett min- 30 tából a 167 658 ljsz. magyar szabadalmi leírásban ismertetett módszerrel meghatároztuk a fermentlé hatóanyag tartalmát, amely 7,3 mg/1. Az egyes tápanyagok előkészítését az alábbi módon végezzük: 35 Kukoricalekvár hőkezelése (hidrolízise): a mintegy 45 s% szárazanyag-tartalmú kukoricalekvárt azonos mennyiségű csapvízzel hígítjuk, majd forrásig melegítjük és 15 percig forraljuk. Forralás után az oldatot lehűtjük, majd csapvízzel az ere- 40 deti térfogatára egészítjük ki. Az így készített friss oldat az ún. hőkezelt kukoricalekvár oldat (hidrolizátum). A kukoricamoslék hőkezelése (hidrolízise): A mintegy 30 tf% szárazanyag-tartalmú kukori- 45 camoslék pH-értékét 2:1 hígítású sósavoldattal keverés közben 2,0—2,5-re állítjuk be, majd a megsavanyított oldatot felmelegítjük és 1 órán át forraljuk. A forró oldatot lehűtjük, vízzel eredeti térfogatára állítjuk be. Az ily módon készí- 50 tett hőkezelt (hidrolizált) kukoricamoslék több héten át bomlás nélkül tárolható hűtött helyiségben. •_____ Az inokulum előállításához használt kukoricalekvár, illetve kukoricamoslék hatóanyag terme- 55 lésre való alkalmasságát a felhasználás előtt mikrobiológiai úton, az alábbi módon határozzuk meg: 10 1 hasznos térfogatú kísérleti üvegfermen■ torba 9 1 30-32 °C-os csapvizet töltünk és az alábbi tápanyagokat adjuk: 60 50 ml metanolt,
