188955. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 koenzimet termelő fermentlé előállítására
1 2 188 955 ■? maradt inokulum fermentléhez azonos térfogatú, 30-35 °C hőmérsékletű vízben, illetve metanolban oldott tápközeget adunk. A tápközeg összetétele: 5,0-7,0 tf% metanol, , 5 0,5—2,0 tf% hőkezelt kukoricalekvár oldat, vagy 0,7—3,5 tf% hőkezelt kukoricamoslék, 0,25—0,6 v% ammónium-hidrogén-karbonát, 0,005-0,05 v% magnézium-klorid 10 0,0005-0,005 v% kobalt-klorid, 0,0003—0,003 v% 5,6-dimetil-benzimidazol és 0,002—0,008 v% nátrium-biszulfit. A hőkezelt kukoricalekvár oldata (hidrolizátuma) helyett alkalmazhatunk kukoricalekvárt is, 15 vagy helyettük az ún. „kukoricamoslékot hőkezelve, illetve kukoricalekvárral vagy kukoricalekvár hidrolizált oldatáyal elegyítve. A kukoricalekvár, illetve a kukoricamoslék hőkezelését első példánk a) pontjában ismertet- 20 jük. A kukoricamoslék a kukorica alapú keményítő-, szesz- és izo-cukor gyártása során keletkezik, amidőn a kukorica áztató vizét és a szeszgyártás üstmaradékát együttesen bepárolják (Szabadegy- 25 házi Szeszipari Vállalat). A kukoricamoslék jellemzői: szárazanyag-tartalom 25—35 tf% 2000-2200 mg/100 g 1800— 1850 mg/100 g 30 700—800 mg/100 g 400—750 mg/100 g 6,5 tf% 3,6-4,1 A mintegy 10 tf% fermentlé elvételt, illetve 35 táptalaj beadagolását 6—8 napon át folytatjuk, miközben a vegyes populáció Bi2 koenzim terösszes nitrogén szerves nitrogén összes foszfor szulfát-tartalom hamu pH-érték melőképessége fokozatosan javul, amit a fermentlé hatóanyagtartalmának meghatározásával és a metanol asszimilációs fa továbbiakban metano- 40 lizis) sebességének _ mérésével követhetünk nyomon. Amikor a metanolizis sebessége eléri a 0,2 g metanol/1 fermentlé/óra küszöbértéket, a tápközeghez a fent megadott tápanyagokon túlmenően 45 0,05—0,2 v% ammónium-szulfátot és 0,002—0,006 v% o-xilidint is adunk és a félfolyamatos'fermentálást mindaddig (mintegy 7-10 napig) folytatjuk, amíg a metanolizis sebessége 0,2—0,3 g metanol/1 fér- 50 mentlé/óra, ekkor éri el a félfolyamatos fermentáció az egyensúlyi állapotát. Ily módon kialakul a félfolyamatosan üzemelő fenntartó fermentlé, amelynek hatóanyag-tartalma mintegy 15-16 mg/1. A félfolyamatos fenn- 55 . tartó fermentálást legalább egy évig folytat(hat)juk, azaz naponta mintegy 10 tí% fermentlevet veszünk el és helyébe azonos térfogatú, a fentiekben megadott 0,05—0,2 v% ammónium-szulfáttal 60 és 0,002—0,006 v% o-xilidinnel kiegészített tápközeget adagolunk. A félfolyamatosítás befejeztével az elvett 5—15 tf% fenntartó fermentlevet már nem dolgozzuk fel, hanem szakaszos módon egy-két napig utófermentáljuk (termelő fermentálás). A szakaszos termelő fermentálást oly módon végezzük, hogy az első napon a félfolyamatos fenntartó fermentléhez — a magnézium-klorid és a nátrium-biszulfit kivételével — azonos tápanyagokat tartalmazó tápközeget adunk, adott esetben csupán eltérő mennyiségben. Kívánt esetben a szakaszos termelő fermentálás második napján már csak 0,3-0,6 tf% metanolt, 0,01—0,1 tf% kukoricalekvárt (vagy adott esetben a fentiekben ismertetett egyéb anyagot) és 0. 01—0,1 v% ammónium-hidrogén-karbonátot adunk a fermentléhez. A szakaszos termelő fermentálás két nap alatt befejeződik és a fermentlé a félfolyamatos fermentálás indításától, illetve a tápanyagok minőségétől és mennyiségétől függően 26—34 mg/1 hatóanyagot tartalmaz. A találmány szerinti eljárás előnyei: — az új inokulum fermentlé fenntartó fermentlévé történő félfolyamatosítása rövid időt igényel, — a természetes tápanyagok lényeges csökkentésével a fermentálás (a félfolyamatos fenntartó és a szakaszos termelő) hatóanyag termelése lényegében nem ingadozik, — az egyéb tápanyagok számának és mennyiségének csökkentésével az eljárás gazdaságosabb, — a kevesebb számú és kisebb mennyiségű tápanyagot tartalmazó táptalaj alkalmazása ellenére az időegység alatt termelhető hatóanyag mennyisége az ismert, eljárásokkal szemben 20—30%-kal nagyobb, — a tápanyagok számának csökkentésével, főként a természetes eredetű anyagok elhagyásával a fermentlé bői a termékelőállítás jobb hatásfokkal történik. A találmányunk szerinti eljárást az alábbi példák szemléltetik anélkül, hogy oltalmi igényünket azokra korlátoznánk. 1. példa a) Inokulum előállítása 10 1 hasznos térfogatú kísérleti üvegfermentorbá 6000 ml 30-32 °C-ra előmelegített csapvizet öntünk, majd az alábbi, megfelelően előkészített /(lásd alább) tápanyagot adjuk: 35 ml metanolt, 100 ml hőkezelt kukoricalekvár oldatot (hidrolizátumot), vagy 150 ml hőkezelt kukoricamoslékot, 30 g ammónium-hidrogén-karbonátot, 1,0 g magnézium-kloridot, 5
