188954. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 koenzim anaerob fermentálására alkalmas új inokulum előállítására
1 188 954 2 A második hétnapos fermentálás után kapott fermentlé az ún. 2 generáció. A 2. generációból homogenizálás után a fermentlé 10%-át (5,0 1) elvesszük és helyébe azonos térfogatú tápközeget adunk. 5 A tápközeg összetétele az alábbi: 5000 ml 30—32 °C-os hőmérsékletű csapvíz 175 ml metanol, 50 ml hőkezelt kukoricalekvár oldat, (hidrolizátum), 10 15 g ammónium-hidrogén-karbonát, 0,5 g magnézium-klorid, 0,25 g kobalt-klórid, 0,15 g 5,6-dimetil-benzimidazo] és 0,10 g nátrium-biszulfit. 15 A tápközeg hozzáadása után a fermentlevet alaposan összekeveijük, a fermentort lezáijuk és egy napig 32—34 °C-on fermentálunk. A fentiekben leírt eljárás során kialakult az új anaerob, mezofíl, metántermelő vegyes mikro- 20 populáció, amelynek törzseit az Országos Közegészségügyi Intézetnél 00076 , 00079 és 00272 szám alatt deponáltuk. [Az egyes törzsek neve és jelzése a felsorolás sorrendjében: Corynebacterium sp. (jelzése 24 A 1); Propionibacterium sp. 25 (jelzése 239 A! 6) és Metanococcus sp. (jelzése MC-017)]. Az inokulum jellemző értékei: pH 5,4-5,8 és 0,5—0,8 1 biogáz/nap/1 fermentlé. A továbbiakban az inokulum már alkalmas 30 B12 koenzím termelésre. A félfolyamatos üzemelés első napján vett mintából a 167 658 ljsz. magyar szabadalmi leírásban ismertetett módszerrel meghatároztuk a fermentlé hatóanyag tartalmát, amely 7,3 mg/1. 35 Az egyes tápanyagok előkészítését az alábbi módon végezzük. Kukoricalekvár hőkezelése: a mintegy 45 s% szárazanyag-tartalmú kukoricalekvárt azonos mennyiségű csapvízzel hígítjuk, majd forrásig 40 melegítjük és 15 percig forraljuk. Forralás után az oldatot lehűtjük, majd csapvízzel az eredeti térfogatára egészítjük ki. Az így készített friss oldat az ún. hőkezelt kukoricalekvár oldat (hidrolizátum). 45 A kukoricamoslék hőkezelése abban különbözik a kukoricalekvárétól, hogy- hígítás nélkül (25—35t% szárazanyag-tartalom),- savanyúbb pH-értékben (2,0-2,5) és 50- hosszab ideig végezzük. Lehűtés után a hőkezelt kukoricamoslék hűtőkamrában több hétig is eltartható. A kiindulási kukoricamoslék összetétele: 55 szárazanyag-tartalom 25-35 1% összes nitrogén , 2000-2200 mg/100 g szerves nitrogén 1800-1850 mg/100 g összes foszfor 700-800 mg/100 g szulfát tartalom 400-750 mg/100 g 60 hamu % 6,5 pH-érték 3,6-4J Az inokulum előállításához használt kukoricalekvár, illetve kukoricamoslék termelésre való alkalmasságát a felhasználás előtt mikrobiológiai úton, az alábbi módon határozzuk meg: 101 hasznos térfogatú kísérleti üvegfermentorba 9 1 30-r- 32 °C-os csapvizet töltünk és az alábbi tápanyagokat adjuk: 50 ml metanolt, 50 g vizsgálandó 45 s% szárazanyag-tartalmú hőkezeletlen (hidroizálatlan) kukoricalekvárt, 30 g ammónium-hidrogén-karbonátot, 1 g magnézium-kloridot, 0,05 g kobalt-kloridot, 0,03 g 5,6-dimetil-benzimidazolt és 0,20 g nátrium-biszulfitot. A tápközeghez - összekeverés után — a BJ2 koenzim fermentorból 300 ml fermentlevet adunk és 30-32 °C-os csapvízzel 10 1-re egészítjük ki, a fermentor nyílását gumilappal lefedjük és 32-34 °C-os termosztátba helyezzük. Naponta felkeverés után 50 ml metanolt adunk hozzá, egyúttal a biogáztermelés sebességének meghatározására 200 ml fermentlevet veszünk ki, a fermentort . lefedjük és 32—34 °C-on tovább fermentálunk. Ha a fermentálás 4. napján a biogáztermelés 0,3-Q,6 1/1 fermentlé/nap, akkor az ismertetett hőkezelés elvégzése után a kukoricalekvár alkamas az inokulum előállítására. Az 5,6-dimetil-benzimidazolt az előírt menynyiségű metanolban feloldva adjuk a táptalajhoz. A többi tápanyagot közvetlenül a tápközeghez adjuk és oldjuk fel. 2. példa Ebben a példában a méretnövelés nélkül végzett inokulum előállítását ismertetjük, amelyre abban az esetben lehet igény, ha csak kis menynyiségű inokulumra van szükség. Az 1. példában leírtakkal azonos módon, 10 1-es hasznos térfogatú üvegfermentorban előállítjuk az inokulum fermentáció első generációját Az első generáció hetedik napján átoltást hajtunk végre oly módon, hogy az alaposan felkevert fermentlé bői 2 1-t kimérünk és egy tiszta 10 1 hasznos térfogatú üvegfermentorba öntjük. Ehhez 6 1 30—32 °C-os ivóvizet öntünk és az alábbi tápanyagokat adjuk hozzá: 35 ml metanolt, 100 ml hőkezelt kukoricalekvár oldatot (hidrolizátumot), 30 g ammónium-hidrogén-karbonátot, 1 g magnézium-kloridot, 0,05 g kobalt-kloridot, 0,03 g 5,6-dimetil-benzimidazolt és 0,30 g nátrium-biszulfitot. Az egyes komponensek beadagolása után a rendszert alaposan összekeveijük, majd 30—
