188953. lajstromszámú szabadalom • Reagens glükóz, koleszterin-, húgysav, hemoglobin meghatározásához
1 188953 2 alkoholt találtuk. A timol-koncentráció optimalizálását az 1. táblázat mutatja, mely szerint ez 2,5 mmól/1. A méréseket adott koncentrációjú (11,10 és 27,75 mmól/1) töménységű glükóz oldattal végeztük. 1. táblázat Peroxidáz aktivitás 8 U/ml 10 U/ml 12 U/ml 14 U/ml 15 U/ml 19 U/ml extinkció 27,75 mmól/1 0,820 0,850 0,865 0,870 í 0,870 0,870 3. táblázat 5 timol mmól/1 1,330 2,000 2,500 3,000 4,000 5,000 extinkció 11,1 mmól/1 0,330 0,365 0,370 0,370 0,370 0,370 extinkció 27,75 mmól/1 0,750 0,860 0,870 0,870 0,870 0,870 Látható, hogy mindkét glükóz-oldat esetében 2,5 mmól/l-es timol-koncentrációnál kapjuk meg a tovább már nem növekvő extinkciót (színintenzitást) . 20 f) A 4-amino-fenazon koncentráció optimalizálását a 2. táblázat adataiból láthatjuk. A méréseket itt is glükóz-oldattal, és 2,5 mmól/1 töménységű timol-oldattal végeztük.. 25 2. táblázat 4-amino-fenazon mmól/1 0,200 0,400 0,600 0,800 N 1,00 extinkció 11,1 mmól/1 0,350 0,370 0,370 0,370 0,370 extinkció 27,75 mmól/1 0,800 0,860 0,870 0,870 0,871 1 - - -- — - — -JL. A táblázat adatai szerint már 0,600 mmól/1 koncentráció is maximális, és tovább nem változó extinkciót adott, de biztonsági okokból 0,800 mmől/1 koncentráció tekinthető optimálisnak. 40 g) Optimalizáltuk a glükóz, koleszterin és a húgysav rnéréséhez szükséges peroxidáz koncentrációt is. (Lásd 3. táblázat.) E szerint a legalkalmasabb töménység a 15 U/ml. 1 U = 1 nemzetközi egység, amely 1 mmól szubsztrátot 45 1 perc alatt lebont. A felhasznált peroxidáz más enzimszennyezést zavaró töménységben nem tartalmazhat. Látható az adatokból, hogy a szőlőcukorral kiváltott szín intenzitása (extinkciója) már 14 U/ml enzimaktivitásnál eléri a maximumot, de a kellő biztonság miatt a 15 U/ml aktivitás mellett döntöttünk, koleszterin és húgysav meghatározásakor pedig a 18 U/ml aktivitás mellett. h)A koleszterin-meghatározásnál az oldékonyság megkönnyítésére detergenseket használtunk, így 9-lauriléter-polietilénglikoléter: LÓBA, Austria) vagy Brij 45. (polioxietilénlauriléter: BDH, Anglia) használható. HEzëïT"optimális koncentráció tartománya: 0,4— 1,2%. Találmányunk szerinti reagens gyakorlati használhatóságát az alábbi eljárásokkal vizsgáltuk. 1. Kalibrációk tapasztalatai: 2,775—33,300 mmól/1 töménységi tartományban vizsgáltuk a szőlő cukor kimutathatóságát és mennyiségi mérhetőségét. Az adatokat részben a 4. táblázatban, részben az 1. ábrán foglaltuk össze matematikai kiértékelés után. Az adatokból látható, hogy a mérési karakterisztika — az adott tartományban — lineáris. A színreakció kifogástalan működése miatt a cukor jól mérhető. A 4. táblázatban használt jelzések az alábbiak: x: bemért cukor koncentráció; n: párhuzamos mérések száma; ÿ: a mért extinkciók átlagai; Y: a kalibrációs egyenes egyenletéből számított extinkciók; d%: a mért és számított extinkciók %-os különbsége ( 100% a számított); fR: a regresszió próbája; Fl: linearitás „F” próbája; sz.f.:linearitás szabadságfokai; P: linearitás valószínűsége: mivel ez nagyobb 10%-nál, ezért nem tér el szignifikánsan az egyenestől. 4. táblázat X mmól/I 2,775 5,550 8,325 11,100 13,875 16,650 22,200 27,750 33,300 n 3 3 3 3 3 3 3 3 3 ÿ 0,0950 0,1833 0,2783 0,3683 0,4616 0,5500 0,7300 0,9133 1,1210 Y 0,0951 0,1860 0,2769 0,3679 0,4588 0,5497 0,7316 0,9135 1,0953 d%-0,10-1,45 +0,50 +0,10 +0,61 +0,05-0,22-0.02 + 2.32 Fr=246 895; FL=1,20746; (sz. f.: 6; 16) P0.10 3
